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H5N1亚型禽流感具有巨大的公共卫生威胁性,目前已有200多人感染该病毒,其中50%以上患者死亡。研发针对H5N1亚型禽流感病毒的治疗制剂是禽流感大流行防控计划的重点。本研究旨在构建可与H5亚型高致病性禽流感病毒特异性结合的单链可变区(Single-chain variable fragment, ScFv)抗体,以期为使用免疫制剂治疗H5亚型禽流感病毒感染积累数据。首先提取分泌抗H5亚型流感病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞总RNA,以简并引物,经RT-PCR扩增小鼠抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,用(Gly4Ser)3连接肽基因,经重叠延伸反应,在体外将VH和VL基因装配成单链可变区ScFv抗体基因,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建了表达抗H5亚型禽流感病毒的ScFv抗体载体;经辅助噬菌体超感染,构建了抗H5亚型禽流感病毒的ScFv抗体噬菌体抗体库。再以H5亚型流感病毒为抗原对抗体库进行淘选和富集,经过3轮“吸附——洗脱——扩增”的富集筛选,噬菌体—ELASA鉴定得到一个活性较高的与H5亚型流感病毒抗原结合的克隆pCANTAB5E-F。序列测定符合抗体可变区结构特点。将重组的ScFv转化大肠杆菌TG1, IPTG进行诱导表达,得到可溶性的单链抗体,用诱导表达的菌液作SDS-PAGE、Western blot和ELISA鉴定表明,pCANTAB5E-F在E. coli TG1得到正确表达,并且表达的ScFv抗体有较好的生物学活性。HI实验表明获得的重组ScFv抗体具有良好的HI活性,与母源单抗具有类似的生物活性。本研究获得了与H5亚型流感病毒结合特异性较高的ScFv抗体,并实现了可溶性表达,为进一步进行H5亚型流感病毒的治疗性抗体的研究奠定了基础。