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背景动脉粥样硬化(AS)是多因素相互作用所导致的复杂病变,其中脂质代谢的异常和血管壁的慢性炎症是AS发生和发展过程中的重要特征。很多炎症因子可以同时参与炎症反应和脂质代谢的调节。正五聚蛋白3(PTX3)是近年来新发现的一个炎症因子,属于长链正五聚蛋白,与动脉粥样硬化和冠状动脉疾病密切相关。研究发现修饰后的脂蛋白可以诱导人血管平滑肌源性泡沫细胞表达PTX3,并且很多研究证明了在人动脉粥样硬化斑块进展期,动脉粥样硬化斑块脂核中的巨噬细胞/泡沫细胞表达大量的PTX3。尽管目前有很多研究发现PTX3在富于脂质的巨噬细胞中呈高表达,但其是否对巨噬细胞的脂质摄取和流出产生影响及相关机制仍不清楚。目的通过研究PTX3对人和小鼠巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)与胆固醇流出的影响及其潜在机制,探讨其在动脉粥样硬化中的作用。方法体外培养人巨噬细胞系THP-1细胞和小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,瞬时转染pSG5hPTX3或PTX3siRNA质粒,与ox-LDL和/或[3H]-胆固醇等共同培养。各组经相应处理后,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞的总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,并计算胆固醇酯(CE)含量；用液体闪烁计数法检测细胞的[3H]-胆固醇含量,并计算胆固醇流出率。用Real time-PCR和Western blot的方法检测各组细胞中PTX3.PPARγ、LXRα和ABCA1等基因和蛋白表达水平的变化。结果1.荧光酶法实验结果表明,50μg/ml ox-LDL刺激THP-1细胞空载体转染组24h后其TC,FC,CE和CE/TC(%)含量分别为298±15nmol/mg,205±9nmol/mg,94±21nmol/mg,31±5.7%,与未加ox-LDL刺激的空质粒组对比具有显著性意义(P<0.05)；PSG5hPTX3转染+ox-LDL刺激组与空载体转染+ox-LDL刺激组比较,可见胆固醇含量显著增高(P<0.05),分别为380±15nmol/mg,223±10nmol/mg,157±21nmol/mg,41±4.1%;而ERK1/2通路抑制剂PD98059加入后可显著抑制ox-LDL的摄取(P<0.05),其胆固醇含量分别为282±19nmol/mg,217±20nmol/mg,71±3nmol/mg,25±1.7%;另外,50μg/m ox-LDL刺激RAW264.7细胞空载体转染组24h后其TC,FC,CE和CE/TC(%)含量较未加ox-LDL刺激的空质粒对照组显著增高(P<0.05),分别为419±23nmol/mg,238±16nmol/mg,182±17nmol/mg,43±3%：PSG5hPTX3转染+ox-LDL刺激组与pSG5空载体转染+ox-LDL刺激组比较,可见胆固醇含量显著增高(P<0.05),分别为551±15nmol/mg,261±23nmol/mg,291±27nmol/mg,53±4.2%;而p38/MAPK-2通路抑制剂SB203580加入后可显著抑制ox-LDL的摄取(P<0.05),其胆固醇含量分别为275±17nmol/mg,188±13nmol/mg,88±15nmol/mg,32±4.1%。2.胆固醇流出的结果显示,与pSG5空载体转染组相比,PSG5hPTX3质粒转染THP-1和RAW264.7巨噬细胞组的胆固醇流出率分别下调了33%和29%；而PTX3siRNA质粒转染RAW264.7细胞组,其PTX3被沉默,载脂蛋白A-I介导的胆固醇流出明显上调,与GFP空载体转染组相比,分别上调了27%和21%。另外,实验还发现,与PSG5hPTX3质粒转染组相比,ERK1/2通路抑制剂PD98056可阻断PTX3过表达的THP-1巨噬细胞组的胆固醇流出率约27%,而p38/MAPK-2通路抑制剂SB203580加入后可阻断hPTX3过表达的RAW264.7细胞组的胆固醇流出率达34%；3.PTX3在THP-1和RAW264.7巨噬细胞系过表达后可显著下调PPARγ、LXRa和ABCA1mRNA和蛋白的表达(P<0.05),而PTX3沉默后,PPARγ、LXRa和ABCA1的表达上调(P<0.05)；结论PTX3可以促进THP巨噬细胞和RAW264.7细胞对ox-LDL的摄取并抑制apoA-I介导的胆固醇流出,ERK1/2通路或p38/MAPK通路可能分别参与了该过程。PTX3也可通过下调PPARγ、LXRa和ABCA1这些胆固醇流出相关分子的表达从而抑制巨噬细胞内胆固醇的流出。我们的研究结果提示,PTX3可能促进脂质在血管壁蓄积,具有促进动脉粥样硬化的作用。