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创伤性脑损伤(traumatic brain injury, TBI)是45岁以下人群中首要死亡原因。弥漫性轴索损伤( diffuse axonal injury, DAI)是TBI的一种常见类型,属于神经外科的急、重症,治疗困难,其残、死率高。据美国昏迷资料库统计:每年的昏迷患者中,DAI患者占55%。由于大多数DAI不适合手术治疗,科学家们一直致力于进行神经保护剂的治疗研究。神经营养因子在神经系统的发育和损伤后的再生修复过程中发挥着重要作用,多年来一直是研究的热点,为神经系统疾病的治疗和预防带来了希望。候选重塑相关性基因15 (candidate plasticity-related gene 15, CPG15)是神经营养因子的一个新成员,它可以被神经活动和神经营养素诱导。CPG15编码的蛋白能调节神经元突起的生长和成熟,促进神经突起的快速生长及分支。本实验建立在大鼠头颅侧向瞬时旋转脑DAI模型的基础上,探讨大鼠脑DAI中不同时间点额叶皮层组织CPG15的表达及意义,为开发新型神经保护剂提供实验和治疗依据。1.大鼠DAI模型的建立目的建立理想的大鼠DAI模型。方法SD大鼠随机分成正常对照组和DAI组,使用贺晓生研制的大鼠头颅侧向瞬时旋转装置引致DAI。进行HE染色,观察测评各组大鼠神经损伤值(NSS)和测定脑组织含水量。结果①伤后大鼠NSS评分明显升高;②DAI组伤后额叶皮层神经元核皱缩深染、胞体增大,肿胀,核仁消失;③DAI组伤后1 d脑组织含水量明显增高(P<0.01),随后逐渐下降,于14 d降至正常水平。结论该大鼠DAI模型的成功制作为进一步实验奠定了坚实的基础。2.大鼠脑DAI后CPG15表达规律研究目的探讨大鼠脑DAI后不同时间点额叶皮层组织CPG15的表达及意义。方法雄性SD大鼠81只,随机分为正常对照组27只和DAI组54只,采用头颅侧向瞬时旋转致伤装置制作DAI模型。DAI大鼠36只按处死时间分为第1d、4d、7d、10d、14d、21d组,每组6只,进行免疫组化染色,形态学观测脑皮层CPG15的表达:细胞浆内出现棕黄色颗粒为CPG15阳性,反之为阴性。其余18只按处死时间分为7d、14d、21d组,每组6只,进行Western-blot方法和RT-PCR检测,在蛋白水平及mRNA水平对CPG15进行半定量检测。结果正常对照大鼠脑皮层组织中无CPG15表达;DAI后,CPG15在神经元胞浆内表达:DAI后1 d,脑皮层见少量CPG15表达,DAI后4 d、7 d、10 d,CPG15表达数量增强,14 d达峰值,损伤21 d仍维持较高水平。在蛋白水平及mRNA水平上对CPG15的检测与免疫组化相符,与14 d达峰值,至21 d仍维持较高水平。结论DAI后CPG15的表达增高,可能与神经元的修复以及神经网络的重塑有关。