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药用植物内生真菌是一种新型、能产生多种生物活性物质的微生物资源。绞股蓝内生真菌多糖(a polysaccharide of Chaetomium globosum,GCP)是自专利菌Chaetomium globosum CGMCC 6882发酵液中分离提取的、具有抗菌、抗氧化、抗癌、抗炎、提高免疫力等多种生物学功效的胞外多糖。但该真菌多糖在动物体消化道中的消化、吸收及促生长、增强免疫的特性尚未进行探索,因此本课题对绞股蓝内生真菌多糖(GCP)的生物学特性、细胞吸收机制和动物体内吸收分布、以及促生长性能和免疫特性进行深入研究,为其在医疗保健和动物饲料添加剂方面的应用提供科学依据。首先研究GCP的生物学特性。检测GCP的糖含量;以扫描电镜观察GCP干粉的形貌特征;采用MTT法检测GCP的细胞毒性;并检测GCP的溶血性;过胃液后的结构稳定性,为其在动物体内的试验提供数据。结果表明:GCP的糖含量为86.14%±0.68%;GCP干粉由结构相似的圆球状颗粒聚集成团,表面层次不一、错落紧致、无明显的结晶形态;MTT试验结果证实:GCP不仅无细胞毒性,还有明显地促进细胞增殖;其溶血性处于生物安全范围内;经人工胃液消化后,GCP分子量无明显变化,未发生降解,且消化前后GCP的特征性结构没有明显改变。其次,研究体外细胞吸收特性。通过FITC标记的GCP,共聚焦显微镜观察GCP细胞的吸收;构建含M细胞的Caco-2细胞肠道模型,研究GCP体外吸收及转运蛋白的表达情况,以分析GCP的体外吸收机制。结果显示:GCP随吸收时间能够依次进入Caco-2细胞的细胞质和细胞核;构建了含M细胞的Caco-2细胞肠道模型:电阻值维持在674Ω·cm~2左右、荧光素钠没有透过肠道模型、碱性磷酸酶的极性值达到2.0以上,这些数据表明肠道细胞模型构建成功;GCP在肠道细胞模型中,从AP侧→BL侧和BL侧→AP侧均有明显的吸收峰,表明GCP有良好的双向吸收转运特性;RT-PCR和Western Blot试验结果表明:GCP在肠道转运过程中,主要触动内吞蛋白Clathrin的高表达以介导GCP的内吞作用。再次,研究了GCP体内分布的特性。以SPF级KM小鼠为试验对象,灌胃GCP后,检测不同时间点小鼠的血糖、脏器及十二指肠、空肠和回肠糖含量的变化,探究GCP在动物体内的分布。结果显示:GCP有明显的降血糖作用;能提高脾脏的糖含量;灌服的多糖在肠道中流动:30 min从十二指肠流动到空肠、90 min从空肠流动到回肠。以SPF级KM小鼠为试验对象,研究GCP促生长特性。灌胃GCP 21 d,检测小鼠的采食量、体重反映促生长性能,以血糖、血脂、血蛋白等生理指标、脏器指数、肠绒毛高度和隐窝深度来分析GCP促生长性能的机制。结果显示:GCP有提高小鼠体重、降低料肉比的效果;能降低血中甘油三脂和低密度脂蛋白、提高高密度脂蛋白的水平;降低小鼠的肝脏指数、剂量依赖性地提高脾脏指数;同时,显著提高十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度的比值,降低空肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度的比值,提高了十二指肠的消化吸收能力。最后,我们对GCP促机体和肠道免疫特性进行深入的研究。在灌胃GCP 21 d后,检测正常小鼠血清中IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ和Ig G含量;检测十二指肠和空肠中IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ和s Ig A含量;对十二指肠和空肠的L-4、IFN-γ和s Ig A进行免疫组化染色,分析免疫因子的肠道表达定位,探究GCP对正常小鼠免疫性能的影响。随后,构建LPS小鼠肠炎模型;检测LPS诱导肠炎的小鼠血清、肠道的免疫因子表达及组织定位,分析GCP对病理状态下小鼠免疫能力的影响。结果显示:长期灌胃不同剂量的GCP能显著提高正常小鼠的IL-2、TNF-α、IL-4、IFN-γ和Ig G等血清免疫因子的水平;提高正常小鼠十二指肠和空肠IL-2、TNF-α、IL-4、IFN-γ和s Ig A免疫因子的水平;IL-4、IFN-γ主要在肠道黏膜层的肠绒毛和隐窝部分高表达,s Ig A则主要表达在肠绒毛表面和黏膜下层;腹腔注射10 mg/kg的LPS构建小鼠肠炎模型,小鼠出现精神萎靡、皮毛蓬乱、肛门污秽、粪便松软、结膜红肿和空肠积液等肠炎症状,且体重下降超过10%,证明模型构建成功;对长期灌胃GCP的小鼠注射LPS构建肠炎模型后,发现高剂量(800 mg/kg BW)的GCP能缓解LPS对肠道的损伤,促进血清免疫因子IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌,降低TNF-α分泌;也能促进十二指肠和空肠中免疫因子IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌,降低TNF-α分泌,从而提高机体多种免疫能力。GCP对LPS诱导肠炎的免疫因子IL-4、IFN-γ和s Ig A表达部位并无影响,但能影响免疫因子在各部位的表达量。通过以上试验证实:GCP具有良好的生物学特性、肠道细胞的吸收特性;在小鼠体内随血流分布,主要进入脾脏;以促进绒毛长度和隐窝深度的方式促进动物消化吸收以促生长;同时,提高血清和肠道的多种免疫因子表达,达到多方面提高机体和肠道免疫功能的效果。因此,绞股蓝内生真菌多糖在食品保健和动物饲料添加剂方面具有良好的应用前景。