器官纤维化是细胞外基质异常过度沉积的最终结果，器官纤维化形成的机制目前尚不十分清楚，而且寻找合理、有效的阻断及逆转器官纤维化的研究仍处于艰难的探索阶段。由于慢性病毒性肝炎在我国的高发性及酒精性肝病的上升趋势，肝纤维化的形成机制及其早期诊断和有效阻断乃至逆转的研究仍旧是基础和临床亟待解决的研究课题。同时，作为慢性损伤转归的器官纤维化问题也存在于肾脏等其他器官中，其研究具有普遍意义。 本室长期致力于肝纤维化的机制研究工作，我们的研究以及国内外的研究证实，器官纤维化的发生是由起动因子引发器官损伤、多种因素共同作用的结果，其中转化生长因子β(Transforming Growth Factor-β，TGF-β)是重要的致纤维化细胞因子，研究发现TGF-β在多种器官纤维化病人和实验动物中明显增高，并能活化培养的肝星状细胞，使其大量分泌细胞外基质，过量的细胞外基质沉积可致器官纤维化，进而影响器官的功能。对于TGF-β在各种疾病中作用的研究主要集中于各类疾病中TGF-β蛋白和mRNA表达的水平，虽然这些研究为探讨TGF-β在这些疾病中的作用提供了理论依据和实验基础，但不足以在分子水平揭示TGF-β作用的实质。进一步研究TGF-β基因的转录调控机制，特别是基因的顺式调控序列和反式作用因子的研究将为揭开TGF-β的作用、拓展阻断TGF-β活化的新技术、新方法提供依据。TGF-β基因序列的成功克隆为在分子水平了解这种蛋白的调节机制提供了基础，极大地推动这一领域的研究。 转化生长因子β属于二聚体性多肽生长因子家族成员，是一类多功能的细胞活性调节因子，在哺乳动物中存在四种异构体，分别为TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β1β2，每一种异构体均有其独特的基因编码，而且其表达具有组织特异性和时间进行性。四种异构体在哺乳动物体内的含量以TGF-β1为主，其作用也最为广泛。其他三种异构体的含量相对较少。TGF-β1分子量为25000道尔顿，成熟的TGF-β1同源二聚体分子在胚第二军医大学博士论文中文摘要胎发生、脂肪形成、纤维发生、肌形成、软骨形成、骨发生、上皮细胞分化以及免疫细胞的功能方面发挥重要作用。 TGF一印在伤口愈合和组织修复中TGF一困具有广泛的活性，在损伤和炎症发生后，渗出的细胞成为TGF一印的主要来源。产生和释放的TGF一pl刺激多种细胞外基质蛋白的产生并抑制这些蛋白的降解，这些功能与组织的修复相关，在某些条件下可以恢复组织的正常结构。TGF一pl的失调可能在多种疾病的形成中发挥重要作用，过量的TGF一pl与病理性的组织纤维化相关，这种组织纤维化常常累及正常器官的功能。 由于TGF一pl在不同的组织器官和不同的疾病进程中发挥的作用不同，调节不同组织中TGF一pl蛋白的表达对于疾病的治疗有重要意义。 TGF一甲是体内细胞因子调节网络中的一个重要环节，其本身的生物合成和作用的发挥同样受多种因素的调节，这些因素包括细胞因子、转录因子、化学物质和某些药物。但这些因素调节TGF一邵基因转录和蛋白合成的分子机制目前还不十分清楚。 另外研究表明，遗传因素在控制血浆中的TGFpl浓度方面发挥重要作用。在TGFpl启动子中含有三个多态性位点，分别是TGF困上游序列的一988C>A、一800G>A、一509C>T，其中一sooG>A、一509C>T处于连锁不平衡状态，一509C>T多态性与血浆中的TGFpl浓度有明显的相关关系，TGF邵基因不同位点存在的特定等位基因与动脉粥样硬化、各种肿瘤的发生有关。但是这些多态性位点是否通过影响TGF困启动子启动活性发挥作用尚未见报道。 近年来的研究表明，与纤维化高度相关的转录因子或称DNA结合蛋白如Sp一1、AP一1等与TGF一pl基因激活密切相关，这些转录因子与TGF一pl基因上游启动调控序列结合是导致基因激活、转录表达的关键。目前国内文献尚未见有关TGF一甲基因的转录调控研究报告。国外文献虽然有少量的研究报告但缺乏从启动子一细胞因子、药物的调控影响一阻断转录因子介导的基因激活这样的系列研究报告。 基于上述原因，为在分子水平了解TGF一盯的调节机制，本研究进行了下述工作:(1)采用PCR方法从正常人全血基因组中获得TGF一困启动子序列，与pCAI’- enhaneer质粒构建含有TGF-pl基因上游5‘端不同长度片段的人TGF一pl基因启动子phTGFo.585、phTGFI.12、phTGFI.423、phTGFI.68、phTGFZ.14质粒重组体，测定各重组体的活性，探讨其调控序列所存在的部位。(2)探讨细胞因子TGF一p卜TNF一以IFN一山IFN一丫、PDGF一BB、bFGF对TGF一田基因启动子活性的影响机制以及它们之间的相互作用。(3)第二军医大学博士论文中文摘要探讨葡萄糖、肝素、己酮可可碱、全反式视黄酸、维生素E等化学物质和药物对TGF一pl基因启动子活性的影响机制，以构建的含有TGF一印启动子的重组质粒为平台，通过对TGF一pl转录调控机制的研究以期寻找治疗TGF一pl相关性疾病的药物。第一部分TGF拟启动子质粒重组体的构建及活性研究 以人基因组DNA为模板，PCR扩增获得5个具有相同3‘端的长度分别为0.585kb、l·12kb、l.423kb、l.68kb、2.14 kb的TGF一pl基因上游5‘的