磷脂酶D制备及催化合成磷脂酰丝氨酸工艺研究

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磷脂酶D是作用于磷脂分子中的磷酰氧键P-O的一类酶,它可以催化两种反应:(1)水解磷脂上的末端磷酸酯键生成磷脂酸和羟基化合物;(2)当有另一种含羟基的化合物存在时,可催化磷脂酰基与其结合,形成新的磷脂,即磷脂酰基转移反应。磷脂酶D广泛存在于各种植物中,在动物和微生物中也有分布。本文以微生物链霉菌作为生产磷脂酶D的菌种,发酵制备磷脂酶D。通过对链霉菌进行自然选育得到了一株磷脂酶D产量较高的链霉菌,以此为出发菌株采用紫外诱变育种方法进行菌种改良,诱变筛选菌株的产磷脂酶D活力提高27%。另外,对发酵制备的酶液进行初步的分离纯化处理,使得发酵液中磷脂酶D的活力提高了2.8倍。通过研究磷脂酶D催化合成磷脂酰丝氨酸工艺,从实验中得出了基本的反应条件:含酶水相中丝氨酸浓度0.1g/ml,调节pH为5.5;水相与含有大豆磷脂的乙醚相以1:2的体积比混合,在28℃的条件下搅拌反应,磷脂酰丝氨酸的收率达57%。同时,本文还对两相体系中磷脂酶D的催化反应动力学进行了初步研究,确定了在磷脂酶D在水-有机相体系中的反应模型。
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