褪黑素对内毒素血症时山羊组织病理和肝线粒体膜通透性的影响

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反刍动物由于其特有的解剖生理特点,在许多疾病发生发展过程中,都可以伴发内毒素血症,甚至内毒素性休克导致死亡。本试验采用静脉注射内毒素(LPS)制备山羊内毒素血症模型,观察山羊内毒素血症时心、肝、脾、肾的病理变化和肝线粒体膜通透性的变化及褪黑素(MT)对其影响,探讨山羊发生内毒素血症时各器官功能发生障碍的情况及线粒体膜通透性变化的规律,探索线粒体膜通透性变化与内毒素血症的相互关系。开展LPS对生物膜的毒性损伤机制的研究,对传统的膜病理学是一个重要的补充和发展,而且有利于对内毒素血症发病机制的进一步了解,对推动内毒素性休克防治理论和实践的进一步提高均具有重要意义。 本试验把山羊随机分成生理盐水组、LPS组、LPS+MT组和MT组,其中每组又分成注射LPS后3h与6h测定2个小组。各组山羊在麻醉后立即剖杀取肝脏,一部分肝脏按规定的流程快速提取线粒体,观察发生内毒素血症时和体外孵育线粒体用Ca2+、LPS和CsA诱导后线粒体悬液在540nm处光密度值变化,从而监测线粒体膜通透性的变化;另外分别取生理盐水组、LPS组和LPS+MT组6h的心、肝、脾和肾组织一小块,于生理盐水中漂洗干净,而后放入10%中性福尔马林液中固定,石蜡包埋,连续切片,用苏木精一伊红染色法染色,光镜下观察病理变化。 结果表明: 1、山羊发生内毒素血症时,心肌纤维变性坏死、断裂,肝血窦变窄,轻微充血,肝中央静脉内有大量红细胞和淋巴细胞聚集,脾组织出血,脾淋巴细胞核浓缩变小,肾组织出血,肾小球变性坏死,而MT能有效的减轻LPS引起的损伤。 2、山羊静脉注射LPS和MT后,肝线粒体膜通透性LPS组与生理盐水组相比差异显著(P<0.05);MT+LPS组和LPS组相比,除MT+LPS6h组在10min时间点外,在其他各时间点均差异显著(P<0.05)。提示LPS能增加肝线粒体膜通透性,诱导MPTP开放,而MT能明显抑制这种作用。 3、山羊静脉注射生理盐水或MT后体外孵育肝线粒体,Ca2+组山羊肝线粒体膜吸光度下降百分比增加明显(P<0.05),而CsA组山羊肝线粒体膜吸光度下降百分比与Ca2+组相比明显减少(P<0.05),提示山羊在正常状态下和被MT保护后,Ca2+诱导线粒体悬液,能增加肝线粒体膜通透性,导致MPTP开放,而CsA能抑制这种作用。 4、山羊静脉注射生理盐水或MT后体外孵育肝线粒体,LPS组山羊肝线粒体膜吸光度下降百分比增加明显(P<0.05),而CsA组山羊肝线粒体膜吸光度下降百分比与LPS组相比明显减少(P<0.05),提示山羊在正常状态下和被MT保护后,LPS诱导线粒体悬液,能增加肝线粒体膜通透性,导致MPTP开放,而CsA能抑制这种作用。 5、山羊静脉注射LPS或LPS+MT后体外孵育肝线粒体,Ca2+组山羊肝线粒体膜吸光度下降百分比增加明显(P<0.05),而CsA组山羊肝线粒体膜吸光度下降百分比与Ca2+组相比明显减少(P<0.05),提示山羊发生内毒素血症时和山羊内毒素血症被MT治疗后,Ca2+诱导线粒体悬液,能增加肝线粒体膜通透性,导致MPTP开放,而CsA能抑制这种作用。
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