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心脏重塑(heart remodeling)是多种心血管疾病共有的病理生理过程,如何控制心脏重塑的发展从而逆转心衰进程是医学上迫切需要解决的问题。 心脏重塑过程涉及显著的心肌细胞凋亡。由于细胞凋亡产生的心肌细胞持续性丧失可能是导致最终心衰的重要原因。压力负荷异常是常见的诱导心脏重塑的病理因素,但压力负荷诱导心肌细胞凋亡以及心脏重塑的详尽的细胞信号机制尚不清楚。 本研究通过体外细胞牵张模型,系统地研究了机械牵张诱导乳鼠心肌细胞凋亡的信号传导机制,探讨了机械牵张刺激转化为细胞内生物信号的机制,并结合动物模型对体外细胞模型得到的结论进行了初步验证,以期阐明压力负荷诱导的心肌细胞凋亡和心脏重塑的细胞、分子机制。 本研究主要包括以下内容: 1.本论文建立了用于研究心肌重塑的心肌细胞的体外培养的牵张模型,首先用AnnexinV-FITC标记及DAPI荧光染色等方法在该模型上证实了牵张诱导的心肌细胞凋亡现象,并在此基础上进行了牵张诱导的心肌细胞凋亡机制的研究。利用激光共聚焦、Western blotting、流式细胞仪和化学生色底物法分别证实牵张诱导了线粒体的膜电位降低、细胞色素C释放和ROS升高以及心肌细胞Caspase 3和Caspase 9的激活等凋亡相关事件。线粒体通透性转化孔PTP的抑制剂环胞菌素A(CsA)能够抑制线粒体的上述变化,说明牵张诱导了心肌细胞线粒体PTP依赖的凋亡途径。Bcl-2家族蛋白也参与调控心肌细胞线粒体凋亡通路。 2.首次进行了牵张诱导下心肌细胞死亡受体信号途径的研究:①证明了牵张诱导下心肌细胞Fas/FasL和DR5/TRAIL死亡受体系统被激活。②构建了表达FADD-DN的重组腺病毒系统,在心肌细胞中导入显性抑制性突变体FADD(FADD-DN)以抑制死亡受体介导的凋亡信号,研究了死亡受体信号通路在牵张诱导的心肌细胞凋亡中的作用。③FADD-DN抑制了牵张诱导的心肌细胞凋亡,Caspases激活和线粒体细胞色素C释放。④外源性死亡