论文部分内容阅读
目的：1、研究大黄素衍生物E19和大黄素衍生物E26对人T淋巴细胞白血病Molt-4细胞株及耐阿霉素Molt-4/ADR细胞株的细胞增殖和凋亡的影响。2、观察大黄素衍生物E19、E26作用Molt-4及Molt-4/ADR细胞株后，细胞增殖、凋亡、耐药相关蛋白的变化情况。3、观察大黄素衍生物E19、E26作用Molt-4及Molt-4/ADR细胞株后，PI3K/AKT、MAPK信号通路相关蛋白变化情况。方法：1、细胞增殖的检测选用MTT法、细胞克隆形成实验。应用MTT法观察药物作用后细胞生长曲线的变化情况；观察药物作用细胞后，细胞克隆数的增长情况。2、细胞凋亡的检测选用DAPI染色法、DNA片段化检测。观察药物作用细胞后，荧光显微镜下染色后的细胞形态的变化。观察药物作用细胞后，DNA片段的影像变化。3、药物作用细胞后，细胞凋亡相关蛋白如bcl-2、procaspase-3、PARP等，耐药相关蛋白Pgp，以及PI3K/AKT、MAPK通路相关蛋白的表达变化情况，使用蛋白印迹法来检测。结果：1、应用MTT法可观察到，选用不同浓度及作用不同时间的大黄素衍生物E19、E26，作用于Molt-4、Molt-4/ADR细胞，可以显著抑制细胞株的增殖，表现为浓度和时间的依赖性。其中，对Molt-4、Molt-4/ADR细胞，E19的48h的半数抑制浓度（IC50）分别为1.199±0.204μmol/L和15.60±1.082μmol/L，E26的IC50分别为1.390±0.152μmol/L和8.564±0.546μmol/L，2、细胞集落形成实验可以观察到，不同浓度大黄素衍生物E19、E26作用Molt-4、Molt-4/ADR细胞后，随着药物浓度的增加，细胞集落的形成数目逐渐减少，有显著的抑制作用。3、不同浓度大黄素衍生物作用细胞后，通过DAPI染色法，在荧光显微镜下可以观察到凋亡细胞的典型形态改变。4、不同浓度大黄素衍生物作用细胞后，通过细胞DNA片段化检测方法，可以观察到典型的DNA降解条带。5、不同浓度大黄素衍生物E19、E26作用Molt-4、Molt-4/ADR细胞48h后procaspase-8、4EBP1、P70蛋白表达无明显变化趋势，bcl-2、procaspase-3、procaspase-9、PARP、c-myc、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、MAPK、p-MAPK、p-P70、p-4EBP1蛋白表达较对照组明显下调，呈浓度依赖性，耐药相关蛋白Pgp在Molt-4/ADR细胞中表达，不随药物作用浓度而变化。大黄素衍生物E19、E26作用Molt-4、Molt-4/ADR细胞不同时间后procaspase-8、MAPK、4EBP1、P70蛋白表达无明显变化趋势，bcl-2，c-myc、p-MAPK、p-P70、procaspase-9，procaspase-3、PARP、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p-4EBP1蛋白表达较对照组明显下调，呈时间依赖性，耐药相关蛋白Pgp在Molt-4/ADR细胞中表达，不随药物作用时间而变化。结论:1、大黄素衍生物E19、E26在体外对T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4、Molt-4/ADR均能够有效抑制其增殖，并诱导其凋亡。2、Caspase家族蛋白、bcl-2、c-myc参与了大黄素衍生物E19、E26对Molt-4、Molt-4/ADR细胞的抑制增殖及诱导凋亡作用。3、大黄素衍生物E19、E26可通过抑制PI3K/AKT、MAPK通路诱导Molt-4、Molt-4/ADR细胞凋亡。