表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒抑制肺腺癌细胞株迁移活性研究

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目的:将表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(Newcastle disease virus expressing therabies virus glycoprotein,rl-RVG)感染至体外培养的人肺腺癌A549细胞、小鼠肺腺癌LA795细胞,观察重组新城疫病毒rl-RVG对肺腺癌细胞株A549、LA795的迁移影响,初步探讨重组新城疫病毒抑制细胞迁移及其可能的机制。  方法:重组新城疫病毒rl-RVG直接感染A549、LA795细胞为rl-RVG实验组,新城疫病毒LaSota株处理的A549、LA795细胞组及未感染病毒的A549、LA795细胞组各自代表NDV对照组及空白对照组。Western blot法检测新城疫(Newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶糖(HN)蛋白及狂犬病毒糖蛋白(Rabies Virus Glycoprotein,RVG),细胞增殖实验测定新城疫病毒使用的最佳作用浓度;划痕实验及Transwell法测A549迁移;免疫荧光法检测MMP2蛋白表达;Western blot法检测E-cadherin、MMP2蛋白表达。  结果:空白对照组无NDV、rl-RVG表达,rl-RVG仅在感染rl-RVG细胞组有表达,NDV在感染rl-RVG细胞组及感染NDV细胞组皆有表达;与空白对照组相比,rl-RVG及NDV稀释浓度大于5×10-5对细胞的增殖有抑制作用(P<0.05); rl-RVG组迁移的距离及细胞数明显减少(P<0.05)。与空白对照组及NDV感染组相比,免疫荧光法显示rl-RVG组MMP2蛋白表达水平减弱(P<0.05),MMP2蛋白表达水平下降(P<0.05); Western blot法显示rl-RVG组E-cadherin蛋白表达水平上调(P<0.05),MMP2蛋白表达水平下降(P<0.05)。  结论:成功构建的重组新城疫病毒rl-RVG能稳定、高效地转染致人肺腺癌A549、小鼠肺腺癌LA795的迁移抑制,并可能通过影响肺腺癌A549、 LA795上皮细胞-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)过程中的调控因子E-cadherin,MMP2蛋白而对细胞迁移而作用。
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