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毛色是犬类重要的经济性状,在确定品种纯度和亲缘关系方面起着重要的作用。开展犬毛色基因的遗传学研究具有理论意义和经济价值。本研究以公安部南京警犬研究所繁育的中系史宾格犬为试验材料,选择MC1R、TYRP1基因为毛色主要候选基因,探讨MC1R和TYR1基因的多态性及其与犬毛色性状的关联性,为犬毛色性状遗传育种研究提供分子生物学依据。通过以上研究,获得以下主要研究结果:(1)中系史宾格犬MC1R基因完整CDS区全长954 bp,编码317个氨 基酸。该序列与犬、马、人等11种动物MC1R基因CDS区存在68.24%～100%的同源性,相应氨基酸序列的同源性达59.81%～100%,系统发育树表明,中系史宾格犬与拳师犬亲缘最近,与鸡的亲缘关系最远。表明MC1R基因在不同哺乳动物间具有较高的保守性,发挥相似的功能。(2)本试验主要采用DNA测序、PCR-RFLP、AS-PCR和PCR-SSCP技术分别对2种毛色的中系史宾格犬MC1R、TYRP1基因的CDS区进行了遗传多态检测。研究结果表明:在MC1R基因编码区出现3个SNP位点:A268G、G313A、C476A;其中在第268 bp处,发生A>G(AGC-GGC)的突变,并在该位点检测到2个等位基因,产生3种基因型:AA、AG、GG,该突变导致编码的氨基酸由丝氨酸(serine)突变为甘氨酸(glycine);在编码区第313 bp处,发生G>A(GCC-ACC)的突变,该突变导致编码的氨基酸由丙氨酸(alanine)突变为苏氨酸(threonine);编码区第476bp处,发生C>A(CCG-CAG)的突变,该突变导致编码的氨基酸由脯氨酸(proline)突变为谷氨酰胺(glutamine)。同样,在7TRP1基因编码区出现3个SNP位点:T121A、C991T、P345△,其中在TYRP1基因外显子2(以第2外显子为起始)第121bp处存在T>A的突变,该突变导致编码的氨基酸由半胱氨酸(cysteine)突变为丝氨酸(serine);在TYRP1基因外显子5第991 bp处存在C>T的突变,该突变导致编码的氨基酸由谷氨酰胺(glutamine)突变为终止子;外显子5第1033-1035 bp处存在3个碱基的缺失,该突变导致编码的氨基酸脯氨酸(proline)缺失。(3)对中系史宾格犬群体进行Hardy-Weinberg平衡检验,发现该群体在C476A、T121A和P345△突变位点上处于平衡状态(P>0.05),且T121A和P345△这两个位点的基因型频率分布完全一致。C991T基因型频率分布未达到H-W平衡(P<0.05),基因型在群体间的分布差异极显著(P<0.05)。对MC1R基因和TYRP1基因多态位点间连锁不平衡分析表明:MC1R基因3个SNP位点两两间连锁不平衡数｜D’｜都为1,γ2=1,表明MC1R基因3个SNP位点共同位于同一单倍域,为完全的连锁不平衡;TYRP1基因3个SNP位点两两间连锁不平衡数|D’|都为1,γ2>0.374,表明TYRP1基因3个SNP位点共同位于同一单倍域,存在强的连锁不平衡。(4)关联分析表明,未发现史宾格犬MC1R基因C476A突变位点与犬的毛色有显著的相关性(P>0.05)。7YRP1基因T121A和P345△多态位点与史宾格犬2种毛色极显著相关(P<0.01);C991T位点与史宾格犬2种毛色显著相关(P<0.05)。(5)通过phase 2.1软件对TYRP1基因的SNPs进行单倍型分析,共得到3种单倍型和6种单倍型组合,AC△单倍型为优势单倍型,关联分析表明AC△单倍型与犬的褐白花毛色极显著相关(P<0.01);H1、H2、H3单倍型组合决定褐白花色史宾格犬;H4、H5、H6单倍型组合都是黑白花色史宾格犬。(6)中系史宾格犬TYRP1家系分析表明黑白花对应于褐白花毛色是常染色体显性遗传,其单倍型遗传符合孟德尔分离定律,能稳定的遗传给后代。