本实验室利用大肠杆菌表达系统已经成功表达了来自Aspergilus．Oryzae的果胶酸水解酶(Polygalacturonase PG)和来自Aspergillus．nidulans的果胶酸盐裂解酶(Pectate Lyases PL)，并发现它们都可以降解植物性物料中的果胶类物质，恢复植物成熟细胞壁的伸长。本文通过NCBI搜索到来自番茄的类果胶酸盐裂解酶P56的基因序列-LAT56，其与Asporgillus-nidulans的果胶酸盐裂解酶PELA保守区基因序列的相似度高达90％以上。P56蛋白作为第一个被发现的来源于植物界的果胶酸盐裂解酶由Wing etal于1989年在番茄花粉中报道，但至今未见其在任何表达系统中表达的文章。 本文尝试利用大肠杆菌表达系统表达P56蛋白，并鉴定其PL活性。由于目的材料的难以获得，采用overlap-PCR的方法从番茄基因组DNA中克隆得到P56完整的cDNA序列L56。通过构建一系列重组表达质粒PET28a(+)／L56、PET32a(+)／L56和PET43.1b(+)／L56，并将它们分别导入大肠杆菌BL21-C0denPlus(DE3)-RIL中于0.5mM IPTG、15℃、180rpm诱导表达48h，收集菌体超声破碎，使用Ni-NTA His·Bind Resins进行纯化后在lOmM PH 7.OTris～HCl中透析并使用肠激酶消化最终得到了初步纯化的可溶的P56。使用双键法对重组的和初步纯化的P56进行检测，均未检测到显著的裂解酶活性。文中推测：一方面可能是蛋白的融合影响了P56的正确折叠；另一方面可能是P56需要翻译后的加工(如糖基化)才具有活性。发现三种重组菌PET28a(+)／L56／BL21、PET32a(+)／L56／BL21和PET43.1b(+)／L56／BL21表达后分别产生的三种融合蛋白His-P56、Trx-P56和Nus-P56的溶解性依次提高，其中融合蛋白Nus-P56可完全溶于细胞破碎后的上清中。使用ESP酵母表达系统表达P56，经SDS-PAGE检测未能看到目的蛋白条带，使用双键法也未能检测到显著的裂解酶活性。