三种小鼠骨质疏松模型骨组织形态计量学观察与评价

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目的:⑴观察D-半乳糖、去卵巢、去卵巢联合D-半乳糖对骨组织骨形态计量学及骨生物力学的影响。⑵比较三种骨质疏松动物模型的异同。⑶探讨雌激素对D-半乳糖和去卵巢联合D-半乳糖致小鼠骨质疏松模型的作用。   方法:SPF级雌性昆明小鼠60只,随机分为假手术组、D-半乳糖组、去卵巢组、去卵巢+D-半乳糖组、去卵巢+D-半乳糖+己烯雌酚组和D-半乳糖+己烯雌酚组,每组10只,每周称重一次。去卵巢组、去卵巢+D-半乳糖组、去卵巢+D-半乳糖+己烯雌酚组小鼠进行双侧去卵巢手术,假手术组、D-半乳糖组和D-半乳糖+己烯雌酚组小鼠只做切开皮肤与肌肉,再缝合手术,不切除卵巢。各组小鼠休养2d后进行正式实验。假手术组和去卵巢组小鼠按体重每天颈背部皮下注射、灌胃给予等量蒸馏水,D-半乳糖组和去卵巢+D-半乳糖组小鼠按体重每天颈背部皮下注射D-半乳糖120mg.kg-1.d-1,灌胃给予等量蒸馏水。去卵巢+D-半乳糖+己烯雌酚组和D-半乳糖+己烯雌酚组小鼠按体重每天颈背部皮下注射D-半乳糖120mg.kg-1.d-1,灌胃给予己烯雌酚0.038mg.kg-1.d-1。所有小鼠于处死前第10d、第11d颈背部皮肤皮下注射盐酸四环素35mg/kg各一次,于处死前第3d、第4d颈背部皮肤皮下注射钙黄绿素7.5mg/kg,实验全程自由饮食,每周称重1次,实验周期为70d。实验结束后,摘眼球取血,然后颈椎脱臼处死小鼠,称重并计算脑、肝、肾、心脏、肺、子宫、脾的器官系数,测定血清抗氧化指标T-SOD、MDA,右股骨进行三点弯曲骨生物力学观察,右胫骨进行不脱钙骨组织切片及骨形态学计量学观察与评价。   结果:①各组小鼠体重变化:与D-半乳糖组比较,D-半乳糖+己烯雌酚组小鼠第3、5、8周体重降低(p<0.05)。与去卵巢+D-半乳糖组比较,去卵巢+D-半乳糖+己烯雌酚组小鼠第7、8、9周体重显著降低(p<0.01)。②各组小鼠脏器系数变化:与假手术组比较,去卵巢组子宫系数降低(p<0.05),去卵巢+D-半乳糖组显著降低(p<0.01)。与D-半乳糖组比较,去卵巢组子宫系数显著降低(p<0.01),去卵巢+D-半乳糖组子宫系数显著降低(p<0.01)。与去卵巢+D-半乳糖组比较,去卵巢+D-半乳糖+己烯雌酚组子宫系数升高(p<0.05)。③各组小鼠血清抗氧化指标变化:各组小鼠相互比较,血清T-SOD和MDA均无统计学意义。④各组小鼠股骨生物力学观察:与假手术组小鼠比较,D-半乳糖组、去卵巢组、去卵巢+D-半乳糖组最大载荷显著降低(p<0.01)。与D-半乳糖组比较,去卵巢组最大载荷降低(p<0.05),D-半乳糖+己烯雌酚组最大载荷增加(p<0.05)。⑤各组小鼠胫骨上段骨形态计量学观察:与假手术组小鼠比较,去卵巢组小鼠胫骨上段骨小梁面积百分数(%Tb.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)分别降低了50.4%、25.4%、50.9%(p<0.01),骨小梁分离度(Tb.Sp)升高了169.4%(p<0.05),反映骨吸收指标的破骨细胞周长(Oc.Pm)、破骨细胞数(Oc.No.)、破骨细胞周长百分数(%Oc.S)、每毫米破骨细胞数(Oc.N/mm)显著升高(p<0.01),反映骨形成指标的荧光标记周长百分数(%L.Pm)、骨矿化沉积率(MAR)、骨形成率(BFR/TV、BFR/BV、BFR/BS)显著降低(p<0.01)。D-半乳糖组小鼠胫骨上段骨小梁面积百分数(%Tb.Ar)降低了30.4%,但无统计学意义。然而反映骨吸收的四个指标均明显升高(p<0.05),反映骨形成的四个指标也明显降低(p<0.05)。去卵巢+D-半乳糖组小鼠也有明显的骨质疏松的表现,但各指标与去卵巢组相比,没有显著性差别,与D-半乳糖组相比,各指标也没有显著性差别。两个雌激素预防组对D-半乳糖和去卵巢联合D-半乳糖导致的骨质疏松相关指标均有明显的对抗作用。   结论:⑴去卵巢、D-半乳糖、去卵巢联合D-半乳糖均能建立小鼠骨质疏松模型。⑵与去卵巢组比较,D-半乳糖组的骨吸收活性较低,骨形成活性较强,骨强度增加,去卵巢联合D-半乳糖组与去卵巢组相比,无明显差别。⑶雌激素能有效防止D-半乳糖和去卵巢联合D-半乳糖致小鼠骨量丢失,增加骨强度。
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