[目的]：验证咖啡因对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)保护作用，并探讨咖啡因干预EAE的可能机制。 [方法]：采用药理学和神经生物学方法。(1)实验分组：雌性Wistar大鼠40只(140～160g)随机分成4组：①CFA对照组(Control组，n=10只)，②经典EAE组(EAE组，n=10只)，③咖啡因10mg/kg组(CAF10组，n=10只)，④咖啡因30mg/kg组(CAF30组，n=10只)。抗原致敏前一周，CAF10组和CAF30组开始分别按10mg/kg.d和30mg/kg.d饮用咖啡因，其余各组正常饮水。EAE组、CAF10组、CAF30组Wistar大鼠四肢足垫皮下注射0.4ml的豚鼠脊髓匀浆(guineapigspinalcordhomogenate，GPSCH)和完全弗氏佐剂(completeFreud’sadjuvant，CFA)制成的抗原乳剂，免疫诱导EAE模型。Control组四肢足垫皮下注射0.4ml的生理盐水和CFA制成的混合乳剂。GPSCH-CFA免疫当日定为第0天。所有大鼠分别于0、48h腹股沟皮下注射百日咳疫苗0.1ml(1×109菌体)。(2)观察指标：每日观察并记录动物体重及行为学的变化两次。观察咖啡因对实验动物的EAE发病率、神经功能缺损评分的影响。致敏后第20天处死动物，取胸髓、腰髓、大脑和脑干以4％多聚甲醛固定，送做病理学检查，应用苏木素-伊红和Kluver&Barrera髓鞘染色方法观察实验动物中枢神经系统(centrolnervoussystem，CNS)病理变化；采用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscriptasepolymerasechainreaction，RT-PCR)法检测颈髓干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白介素-10(interleukin-10，IL-10)、转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1，TGF-B1)和腺苷A1、A2A受体mRNA的表达。 [结果]： (1)行为学观察：EAE大鼠于免疫后11天开始陆续发病，12-15天为发病高峰期。EAE组平均潜伏期为12.00±0.53天，与EAE组相比，CAF10mg/kg组(14.67±0.88天)和CAF30mg/kg组(14.50±1.04天)潜伏期明显延长，均有统计学意义(P＜0.05)。患病大鼠发病前2-3天出现进食减少、体重下降、活动减少，继而出现尾巴无力、远端下垂、瘫痪，随后出现步态蹒跚、跛行、后肢无力、瘫痪等症状，多伴有大小便失禁，严重者累及前肢，部分出现肢体瘫痪而不伴尾巴瘫痪。EAE组发病率8/10，CAFlomg/kg组和CAF30mg/kg组发病率为4/10，与EAE组相比有降低趋势，但无统计学差异。EAE组最大症状评分达3.63±0.18，CAF10mg/kg组(2.67±0.33)明显低于EAE组，有统计学意义(P＜0.05)。Control组大鼠体重持续增加，也未见尾巴无力、下垂、麻痹和后肢无力、麻痹等异常。 (2)病理学改变：EAE组的脑、脊髓实质内有大量炎性细胞浸润(以淋巴细胞为主)，神经细胞肿胀、变性、坏死，胶质细胞增生，典型者可见血管套形成、噬神经现象。其中以脑干、脊髓处病理改变最为明显。Kluver&Barrera髓鞘染色可见广泛的神经髓鞘变性、脱失。CAF10mg/kg和CAF30mg/kg组炎细胞浸润和髓鞘变性、脱失程度比EAE组减轻。 (3)RT-PCR检测：①CD4+T型细胞因子：EAE组大鼠颈髓内的IFN-γ、IL-10、TGF-β1的mRNA表达比Control组大鼠升高；CAF10组和CAF30组表达的Th1型细胞因子IFN-γ比EAE组明显下降(P＜0.05)，Treg型细胞因子TGF-β1的mRNA表达比EAE组升高(P＜0.05)。②A1、A2A腺苷受体：A1受体的mRNA水平在EAE组大鼠颈髓内比Control组大鼠下调，该受体在CAF10组和CAF30组内比EAE组明显上调，且有显著统计学意义(P＜0.01)；EAE组大鼠颈髓内的A2A受体比Control组大鼠稍有上调，同EAE组相比，该受体在CAF10组和CAF30组内略有上升，但无统计学意义。 [结论]： (1)低剂量的咖啡因(10mg/kg和30mg/kg)慢性处理能减轻EAE病情。 (2)EAE发病与腺苷受体有联系：EAE大鼠颈髓内A1腺苷受体(adenosineA1receptor,A1AR)的表达比正常大鼠明显下调。 (3)A1和A2A受体非选择性拮抗剂咖啡因可能是通过上调A1AR，伴随着下调促炎细胞因子IFN-γ和上调抑炎细胞因子TGF-β1而发挥抑制/逆转EAE病情的作用。