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札幌样病毒（Sapovirus, SaV）属杯状病毒科,为单股正链RNA病毒。猪感染SaV后表现出以腹泻为主的胃肠炎症状。尽管猪SaV主要感染猪,但目前研究发现某些猪SaV毒株与人SaV毒株具有较高同源性,提示其可能具有在人与猪之间跨种间传播的能力,这也对人类健康构成了潜在的威胁。2008年中国大陆首次报道在规模化猪场中发生SaV感染引起的仔猪腹泻事件,说明猪SaV已给中国的养猪业造成了一定损失。因此,建立猪SaV的ELISA和荧光定量PCR检测方法具有重要意义。根据猪SaV外壳蛋白VP2基因设计引物,扩增出目的片段VP2基因。将其克隆到原核表达载体pET-30a,经酶切、测序鉴定后,再将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21中,用终浓度l mmol·L-1 IPTG诱导,表达产物以包涵体形式存在。超声波裂解菌体后对包涵体进行溶解,再用Ni-NTA柱对重组蛋白进行纯化,并对纯化的蛋白进行复性。经Western-blot检测表明,该重组蛋白能够被SaV阳性血清所识别,具有良好的抗原性。利用表达的重组融合蛋白作为抗原,建立了猪SaV的间接ELISA方法,并对其反应条件进行了摸索,确定了最适工作条件。结果表明,重组蛋白抗原的最适包被浓度为0.64μg·mL-1,最适包被条件为37℃1 h后4℃过夜,待检血清的稀释度为1:50,HRP-兔抗猪1gG的工作浓度为1:2000,待检血清和酶标二抗的反应条件和反应时间分别为37℃下1 h和40 min,TBM底物溶液室温显色10 min,阴阳性临界值为0.203。重组蛋白与猪戊型肝炎病毒、猪肠道病毒9型、猪诺如病毒、猪链球菌2型阳性血清不发生交叉反应,具有较好的特异性。利用已建立的ELISA方法检测81份临床血清样品,检出总阳性率为39.5%。结果表明,建立的间接ELISA方法敏感、特异,可用于临床SaV血清样品的检测。这为ELISA诊断试剂盒的研制开发奠定了基础,为建立规模化猪场SaV感染的快速诊断方法提供了科学依据。最后,根据猪SaV的保守基因序列设计引物和探针,通过对反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量PCR检测方法,并与常规RT-PCR检测方法进行了比较。结果表明,荧光定量PCR方法的检测下限可达16.1拷贝·μL-1,而常规RT-PCR方法的检测下限为1.61×103拷贝·μL-1。对216份粪样的检测结果进一步表明该法（检出4份）比常规RT-PCR方法（检出3份）的灵敏度高。系统进化分析表明,该4株病毒均为GIII型,与SaV上海分离株（FJ387164）同源性为100%。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,适合于猪SaV感染的流行病学调查和临床诊断。