目的:探讨胸腺肽α1(thymosin 1,Tα1)对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)介导的小鼠恶性黑色素瘤体内杀伤效应的影响。方法:取小鼠脾脏分离制备单个核细胞,贴壁法分离DC,加入重组鼠粒-巨细胞集落刺激因子(rmGM-CSF) 10ng/ml、重组鼠白细胞介素-4 (rmIL-4) 20ng/ml扩增5天,并加入肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 10ng/ml促使DC成熟。培养第8天时收集DC,行流式细胞检测及电镜扫描观察其表型及形态变化。反复冻融恶性黑色素瘤细胞株(B16),取其上清液制备B16全细胞抗原,将制备好的抗原负载培养第5天的DC并加入TNF-α促进DC成熟。绒毛柱法分离提纯小鼠脾脏来源的T细胞,与负载B16全细胞抗原的DC共培养,诱导B16细胞抗原特异性CTL。调整B16细胞浓度为5×106/ml,C57BL/6小鼠皮下注射0.2ml制备黑色素瘤肿瘤模型。在荷瘤第9天,将小鼠随机分为3组,每组12只,分别为:①A组(生理盐水对照组);②B组(CTL回输组);③C组(CTL联合Tα1回输组)。治疗给予方式为:通过鼠尾静脉回输CTL,瘤周多点皮下注射Tα1。在荷瘤第9天各组即给予第1次治疗,此后CTL每6天回输1次,每次细胞数为5×106/0.2ml,共3次;Tα1(400μg/kg)每3天皮下注射一次,每次0.2ml,共6次。A、B、C每组又随机分为2个亚组,每个亚组6只小鼠。亚组Ⅰ:用于观察肿瘤生长及小鼠存活情况:1次/3天;根据公式(V)=1/2ab2 (a为肿瘤长径,b为肿瘤短径)计算肿瘤体积和绘制肿瘤生长曲线,同时观察小鼠死亡情况并计算生存率,直至其中任一组小鼠死亡达50%时停止测量体积。亚组Ⅱ:用于测量瘤重和体积:荷瘤第21天颈椎脱臼法处死3个亚组Ⅱ中的全部小鼠,共计18只。取瘤称重,根据公式分别计算瘤重和体积抑瘤率。并取肿瘤组织用于HE染色,观察治疗后3组小鼠肿瘤的病理形态变化并利用透射电镜检测治疗后肿瘤细胞凋亡情况。结果:在荷瘤第18天测得3组小鼠肿瘤的平均体积分别为A组(3.08±0.30cm3) , B组(2.25±0.29cm3)、C组(1.41±0.25cm3),三组肿瘤体积之间的比较有显著统计学意义(F=53.107,p<0.001)。C组体积增长明显小于A组和B组(p<0.01)。在荷瘤第21天C组中2只治疗反应良好小鼠的肿瘤体积进一步缩小,其中一只小鼠至荷瘤第32天时肿瘤基本消退并且至实验结束依然存活。通过观察不同时间肿瘤体积变化曲线可发现C组曲线上升平缓,B组曲线在经历初期的平缓上升后在荷瘤第18天上升趋势开始明显增大。在荷瘤第21天时解剖亚组Ⅱ中的小鼠根据各组肿瘤的平均体积A组(5.05±0.65cm3)、B组(3.49±0.60cm3)、C组(1.51±1.07cm3)计算体积抑瘤率:B组30.89%、C组70.10%以及根据各组肿瘤重量A组(4.58±0.47g)、B组(3.20±0.41g)、C组(1.34±0.99g)计算瘤重抑瘤率:B组30.13%、C组70.74%,C组抑瘤率明显高于B组(p<0.01)。⑵观察各亚组Ⅰ小鼠生存情况:C组生存时间和生存率明显高于A、B两组。C组小鼠的生存曲线下降平缓,A组小鼠至荷瘤32天时全部死亡,B组和C组小鼠从荷瘤第9天至第45天保持83.3%的存活率,但B组小鼠至荷瘤第55天时也全部死亡,而此时C组仍有83.3%的小鼠存活。C组小鼠的中位生存期为60±3.67天,明显高于A组的27±1.84天和B组的49±1.84天(p<0.01)。⑶治疗后的肿瘤组织经HE染色后光镜下可以发现B、C两组肿瘤细胞浸润密度较A组减轻而出血、坏死增多,其中C组肿瘤细胞浸润密度比B组更低而出血、坏死更多。结论:⑴本实验将体外诱导出的肿瘤特异性CTL通过鼠尾静脉成功地进行了回输治疗,这一模式的建立可以作为进一步研究的基础。⑵Tα1能够延长CTL在体内发挥肿瘤杀伤效应的时间和提高其杀伤能力。⑶肿瘤特异性CTL经鼠尾静脉回输联合Tα1瘤周皮下注射治疗小鼠恶性黑色素瘤的效果优于单独经鼠尾静脉回输肿瘤特异性CTL。Tα1在抑制肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠生存时间和提高生存率等方面具有较高的价值。⑷肿瘤免疫治疗配合免疫佐剂可有效提高肿瘤杀伤效率。