目的：通过TAP的分子结构分析，向其中插入一段KGDS序列，构建一种新的嵌合蛋白TAP-KGDS，希望新蛋白具有抗凝及抗血小板聚集两种功能，为新型抗凝药物的研制作一些探索。 方法：①设计 TAP-KGDS序列，由上海生工生物工程技术有限公司合成。PCR扩增目的片段，亚克隆于原核表达载体pET32a(+)，构建重组质粒pET32a(+)-TAP-KGDS，并转化BL21感受态菌，以PCR及双酶切鉴定阳性克隆。②目的基因经IPTG诱导表达，收集菌体，SDS-PAGE电泳，确定最适表达时间及诱导浓度；超声破碎菌体，分别收集上清及沉淀，分析目的蛋白的表达形式；目的蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化，Bradford法定量，并初步测试其抗血小板聚集活性。 结果：①重组质粒经PCR及双酶切鉴定，均获得约209bp的基因片段，与预期大小一致。测序结果显示亚克隆到pET32a(+)中的序列完全正确。②SDS-PAGE分析显示，含重组质粒的工程菌在IPTG的诱导下高效表达分子质量约为24KD的蛋白质，该蛋白以水溶性形式表达为主，在IPTG浓度为1.0mmol/L时，诱导3小时表达量最高。③粗纯化后的融合蛋白约为4.02mg/ml，活性试验证实融合蛋白具有抗血小板聚集效应。 结论：本实验成功构建了TAP-KGDS的原核表达载体pET32a(+)-TAP-KGDS，目的蛋白经IPTG诱导与硫氧还蛋白一起融合表达，融合蛋白具有一定的抗凝血活性，为进一步研究打下了基础。