金黄喇叭菌多糖的分离纯化、结构分析及生物活性的研究

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金黄喇叭菌是一种药食兼用的真菌,它分布广泛、味美可口且营养丰富。目前对金黄喇叭菌的研究主要集中在金黄喇叭菌的营养成分及其抗菌活性等方面。但对金黄喇叭菌多糖的研究甚少,本文主要研究了金黄喇叭菌多糖的提取、分离、纯化、结构鉴定和生物活性等。主要研究结果如下:金黄喇叭菌干品中的粗蛋白、总糖、粗脂肪、粗纤维、灰分、水分含量分别为:22.82%、49.58%、4.36%、4.58%、9.18%、6.98%,且富含多种矿物质元素和人体必须氨基酸。进行金黄喇叭菌多糖水提工艺优化研究。通过单因素试验及正交实验分析表明水提工艺对多糖得率的影响因素依次为:提取次数﹥提取时间﹥提取温度﹥液料比,金黄喇叭菌多糖的水提取工艺的最适条件为:提取温度为90℃,液料比为30:1,提取时间为3h,提取次数为2次,金黄喇叭菌多糖的得率为10.9%。金黄喇叭菌多糖的分离纯化:多糖提取液经过脱色、醇沉、脱蛋白及再醇沉后得到金黄喇叭菌粗多糖CAB,经DEAE-52离子交换柱层析、Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱层析、超滤离心管分离得到单一组分CABⅠ、CABⅡ-2和CABⅢ,并经过高效凝胶渗透色谱测定其重均分子量分别为16271Da、19513Da、56004183Da。CABⅠ的初级结构分析:红外光谱显示CABⅠ在波数3421cm-1处有很强的O-H伸缩振动,在波数2925cm-1处有C-H的伸缩振动,1417cm-1处是多糖羧基中C-O的伸缩振动吸收峰,11511043cm-1表明多糖结构中有吡喃环,867cm-1、800cm-1处的吸收峰表明有甘露糖的存在。利用气相色谱进行单糖组成研究,结果表明CABⅠ含岩藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其摩尔比为1︰2.11︰3.13︰6.45。高碘酸氧化和Smith降解显示CABⅠ中含1→6、1→、1→2以及1→3型糖苷键,岩藻糖和甘露糖可能完全含不可氧化的1→3型糖苷键,葡萄糖几乎完全被氧化主要含1→6、1→、1→2型糖苷键,半乳糖完全被氧化含1→6、1→、1→2型糖苷键。核磁共振结果分析表明CABⅠ含有α、β两种糖苷构型,部分C-2、C-3和C-6被取代,C-4没有被取代。多糖组分CABⅠ、CABⅡ和CABⅢ的生物活性研究结果表明,金黄喇叭菌多糖对DPPH·自由基有清除活性并且有较好的还原力,表明其具有一定的抗氧化活性;以豚鼠血清为补体的模型进行抗补体实验,表明金黄喇叭菌多糖具有良好的抗补体活性;采用MTT法检测了金黄喇叭菌多糖在体外对人体肝癌细胞Hep G2和乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用,结果发现CABⅠ、CABⅡ和CABⅢ对两种癌细胞均有一定程度的抑制作用;金黄喇叭菌多糖在三种生物活性中整体上都呈剂量依赖性,且单一多糖表现出较好的生物活性。
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