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目的： 证实在子宫内膜样癌（Endometrial endometrioid carcinoma，EEC）中假基因PTENP1能竞争性结合miR-200c调控PTEN表达，三者形成典型ceRNA调控机制；而雌激素能诱导EEC细胞株miR-200c表达上调，影响PTENP1-miR-200c-PTEN内源竞争性机制调控子宫内膜样癌发生发展。通过本项目研究，进一步丰富子宫内膜样腺癌发生发展的分子机制，并为开发新的分子靶标药物提供途径。 方法： 第一部分：假基因PTENP1能竞争性结合miR-200c调控PTEN表达，三者存在ceRNA调控关系：qRT-PCR检测子宫内膜样腺癌细胞及新鲜子宫内膜样腺癌组织中PTENP1、miR-200c和PTEN的表达量，比较三者关系；通过生物信息学预测、质粒合成、瞬时转染、qRT-PCR及Western blot实验验证PTENP1、miR-200c与PTEN三者相互调控关系；再利用共转染技术、双荧光素酶报告基因、RNA免疫共沉淀及Western blot实验验证miR-200c与PTEN和PTENP1三者互为靶标并且存在内源性竞争性RNA关系。 第二部分：证明雌激素能通过影响PTENP1-miR-200c-PTEN内源竞争性机制调控子宫内膜样癌发生发展：采用雌激素培养基刺激诱导EEC细胞后，利用qRT-PCR、Western Blot实验观察PTENP1、miR-200c mRNA及PTEN蛋白水平变化。采用CCK8、流式细胞学分析验证在不同的miR-200c表达水平下雌激素对EEC细胞的增殖及凋亡活性改变。 结果： 1.检测43对子宫内膜腺癌新鲜组织样本及4株EEC细胞发现PTENP1、PTEN与miR-200c表达量呈相反关系；PTENP1和PTEN呈低表达，miR-200c呈高表达。 2.生物信息学预测PTEN、PTENP1与miR-200c可能存在靶标关系，qRT-PCR分析显示瞬时转染miR-200c-mimics和miR-200c-inhibitor后PTENP1呈低表达和高表达；转染PTENP1过表达及干扰质粒后检测miR-200c呈低表达和高表达。Western blot结果发现上调miR-200c或下调PTENP1表达水平，PTEN蛋白表达量下降，下调miR-200c或上调PTENP1表达水平，PTEN表达量上升。 3.双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-200c可以抑制PTENP1和PTEN的荧光表达量，而将预测的结合位点突变后，miR-200c对PTENP1和PTEN的调控作用明显降低，由此证明PTEN和PTENP1均为miR-200c的靶基因，进一步通过共转染结果发现PTEN和PTENP1可以竞争性结合miR-200c。RNA免疫共沉淀实验发现miR-200c和PTEN能与细胞中Ago2蛋白结合形成RNA诱导沉默复合体。 4.通过Western blot分析结果表明，当过表达PTENP1的同时转染miR-200c mimics，PTEN蛋白表达量下降，同样的当干扰PTENP1的同时转染miR-200c inhibitor，PTEN蛋白表达量上升，证明PTENP1对PTEN的调控依赖于miR-200c。 5.采用适宜浓度雌激素培养基刺激诱导EEC细胞，分析发现RL-952，Ishikawa细胞株诱导后miR-200c表达升高，PTEN蛋白量下降。而HEC、JEC细胞株诱导后miR-200c未见明显反应。 6.CCK8实验发现RL-952细胞株加入雌激素诱导后细胞增殖能力上升，在雌激素诱导的同时加入miR-200c-inhibitor后增殖能力得到逆转，加入miR-200c-mimics后增殖能力上升。流式细胞实验发现EEC细胞在加入雌激素诱导后G0/G1期细胞减少，S期细胞增加，凋亡活性减少；加入miR-200c-mimics后G0/G1期细胞进一步减少，凋亡活性更低；证明雌激素对子宫内膜腺癌细胞的生物学功能调节依赖于miR-200c。 结论： 雌激素能诱导上调miR-200c，通过影响PTENP1-miR-200c-PTEN内源性竞争调控，下调PTEN蛋白表达量，最终促进子宫内膜腺癌细胞增殖并降低其凋亡率，调控EEC的发生发展。