论文部分内容阅读
[目的]观察5岁组重度低龄儿童龋(Severe Early Childhood Caries,S-ECC)儿童服用含瑞士乳杆菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌的益生菌制剂前后,口腔唾液中变异链球菌数量、pH值以及牙菌斑生物膜微生态的变化,评价该益生菌制剂的防龋作用。[方法]筛选符合纳入、排除标准的5岁S-ECC儿童30名。采用双盲、随机对照试验的研究方法将受试人群随机分为两组,A组(试验组,15人)服用含有瑞士乳杆菌、婴儿双歧杆菌、两歧双歧杆菌的益生菌制剂7天,B组(对照组,15人)服用安慰剂7天。分别采集非刺激性唾液和龈上菌斑:(1)采用细菌分离培养及菌落计数法观察服用制剂前、服用制剂7天后及停服制剂后1周、2周、1个月、3个月六个时间点,唾液中游离变异链球菌的数量及唾液pH值的变化,采用重复测量方差分析对试验数据进行统计分析;(2)采用16S rDNA高通量测序检测服用制剂前及服用制剂7天后牙菌斑生物膜微生态的变化,使用Alpha多样性分析、物种组成分析、Beta多样性分析等对所得OTU进行统计分析。[结果](1)服用益生菌制剂对S-ECC儿童唾液中变异链球菌的生长及pH值的影响:①对唾液中变异链球菌的影响:服用制剂7天后,试验组及对照组唾液中游离变异链球菌的数量与服用制剂前比较均降低,且组间比较差异有统计学意义(P<0.05);停服制剂后1周,对照组与试验组唾液中游离变异链球菌的数量呈上升趋势,与服用制剂前相比差异无统计学意义(P>0.05);停服制剂后2周、1个月、3个月,对照组与试验组唾液中游离变异链球菌的数量与服用制剂前相比差异无统计学意义(P>0.05)。②对唾液pH的影响:服用制剂前、服用制剂7天后及停服制剂后1周、2周、1个月、3个月六个时间点,试验组与对照组唾液pH值的差异无统计学意义(P>0.05)。(2)服用益生菌制剂对S-ECC儿童牙菌斑生物膜微生态的影响:采用Illumina MiSeq测序,服用制剂前、后共60个样品中得到2535490条有效序列,进行优化后,共获得优化序列2235743条。①对菌群结构及多样性的影响:服用制剂前、后牙菌斑生物膜细菌菌群结构及多样性的差异无统计学意义(P>0.05)。②对菌群组成的影响:服用制剂前及服用制剂7天后,试验组与对照组牙菌斑生物膜中部分菌群组成发生变化。在门水平,服用制剂7天后拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria),与服用制剂前相比数量减少,且差异具有统计学意义(P<0.05)。在属水平,服用制剂7天后不动细菌属(Acinetobacter)、放线菌属(Actinomyces)、拟普雷沃菌属(Alloprevotella)、Anaeroglobus、奇异菌属(Atopobium)、颗粒链菌属(Granulicatella)、金氏菌属(Kingella)、假单胞菌属(Psewdomonnas)、月形单胞菌属(Selenomonnas)、链球菌属(Streptococcus)、坦纳菌属(Tannerella)、以及一种未分类的韦荣球菌科(Unclassified Veillonellaceae)与服用制剂前相比数量减少,且差异具有统计学意义(P<0.05)。乳杆菌属(Lactobacillus)在服用制剂7天后与服用制剂前比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。③对菌群丰度的影响:服用制剂前及服用制剂7天后,试验组与对照组牙菌斑生物膜中部分菌群丰度在属水平发生改变。服用制剂7天后不动细菌属(4cinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链球菌属(Streptococcus)与服用制剂前相比水平降低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]7天短期服用含瑞士乳杆菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌的益生菌制剂能抑制5岁组S-ECC儿童唾液中游离S.mutans的生长,该抑制作用在停服制剂1周后逐渐减弱消失;对唾液pH值无明显影响:虽能改变牙菌斑生物膜的部分细菌菌群的组成和丰度,但未改变牙菌斑生物膜的细菌菌群结构和多样性。该益生菌制剂用于儿童龋病防治的效果有待进一步研究。