【摘 要】
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二甲双胍是世界各国临床指南推荐治疗2型糖尿病(T2DM)的首选药物。壳聚糖是已被证明的具有降糖功效的天然多糖,将二甲双胍的结构引入到壳聚糖分子中,既利用二者优良的降糖本
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二甲双胍是世界各国临床指南推荐治疗2型糖尿病(T2DM)的首选药物。壳聚糖是已被证明的具有降糖功效的天然多糖,将二甲双胍的结构引入到壳聚糖分子中,既利用二者优良的降糖本领,又可以充分发挥壳聚糖的天然性和安全性,提高双胍药物的生物利用度。本文针对2型糖尿病(T2DM)的胰岛素抵抗,制备了壳聚糖双胍盐酸盐,从分子生物学角度深入探究其对胰岛素抵抗肝癌细胞(HepG2)中关键生物因子的影响。首先,本文分别以相对分子质量为50KDa和100KDa的壳聚糖和双氰胺为原料,制备出了壳聚糖双胍盐酸盐,分析研究了反应温度、反应物摩尔比、反应时间、反应pH值等因素对制备反应产率和产物取代度的影响,确定了最优的制备条件为:pH值为1,壳聚糖与双氰胺的反应投料摩尔比为1:3,反应时间为15min,反应温度为100℃。通过紫外光谱分析、红外光谱分析和元素分析等分析手段确定产物基本结构单元、组分、含量。其次,采用高浓度胰岛素对HepG2细胞进行诱导,以细胞活力值和葡萄糖消耗量为指标,建立HepG2细胞的胰岛素抵抗模型。对壳聚糖双胍盐酸盐进行体外细胞毒性测试,筛选出对细胞活力影响较小的样品。研究了壳聚糖双胍盐酸盐对肝细胞葡萄糖消耗以及胰岛素信号传导通路中胰岛素受体(InsR)和信号效应蛋白葡萄糖转运蛋白-2(GLUT-2)的影响。结果表明:壳聚糖双胍盐酸盐能够显著提高胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量和InsR蛋白表达量,同时降低GLUT-2转运蛋白表达量,有效改善HepG2细胞的胰岛素抵抗情况。取代度是其中最关键的影响因素,而与样品浓度未见明显的相关性。
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