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大肠杆菌(Escherichia coli)作为最常见的细菌和病原之一,是世界各个地区微生物群的重要组成部分,在一定条件下可以通过多种途径引起人和动物的感染,给公共卫生安全带来担忧。大肠杆菌病原可以定植于呼吸道,肠道和生殖道等多种部位,其中致病性大肠杆菌在定植的过程中可以侵袭或损害宿主导致多种畜禽和人类发病并呈现不同的发病类型从而引起不同的大肠杆菌病,主要包括猪大肠杆菌病、牛大肠杆菌病和禽大肠杆菌病。各年龄均可感染,四季均发,给养殖业带来严重的经济损失。目前,世界各地关于大肠杆菌的系统研究均有报道,但在中国西南地区的系统研究资料较少还待补充,尤其是鸭源大肠杆菌病的研究。西南地区天气炎热,湿度较大,很适合大肠杆菌的滋生,且西南地区养鸭业历史悠久,常有报道鸭养殖场大规模发生大肠杆菌的流行。为探究西南地区鸭致病性大肠杆菌的分子流行特征,为西南地区致病性大肠杆菌防控策略提供依据,本研究从荣昌区、大足区和隆昌市2014-2021年期间各鸭场分离得到大量细菌分离株,通过16sr DNA,PHO-A基因和生化试验对其进一步鉴定,并研究其分型特征和毒力因子携带情况,并进行药敏试验以期望为该地区大肠杆菌的临床用药提供依据。研究分析结果如下:1.0分离株鉴定在2014-2021年期间,从荣昌区、大足区和隆昌市病死鸭心脏、肝脏、脾脏和浆膜病料中分离得到大量细菌分离株,通过培养基筛选,生化试验鉴定,16sr DNA和PHO-A基因设计引物对纯化得到的细菌分离株进行鉴定,最终鉴定得到107株大肠杆菌,荣昌区82株,大足区5株,隆昌市20株。2.0分型研究结果本研究通过糖发酵分型试验,16sr DNA序列构建进化树和遗传结构堆叠图,wzx/wzy基因进行O抗原血清型鉴定和ERIC-PCR基因型分型对荣昌区、大足区和隆昌市107株大肠杆菌分离株进行系统分析。糖发酵分型试验基于其分解单糖,二糖和多糖的能力分为三簇,B1占51%,B2占41%和B3占8%;进化树分为三簇,clusterⅠ占98%,clusterⅡ和clusterⅢ,在clusterⅠ内又分为A、B、C和D四小簇,2014-2021年期间主要引起流行感染的分离株为ⅠA和ⅠB,2014-2017为ⅠA,2017-2020为ⅠB,2020-2021为ⅠA和ⅠB;遗传结构堆叠图分为6大类群,分别为A 3%,B 66%,C 7%,D 4%,E 18%和F 2%,其中有42%以上分离株含有两种或两种以上遗传结构,通过与16sr DNA进化树表型比较推断出三地接壤的荣昌区,大足区和隆昌市的大肠杆菌的进化方向可能是多种大肠杆菌菌群遗传交叉传播;O抗原血清型试验鉴定出9种O抗原血清型,其中O78占37.3%,O7占22.3%,O121和O145均占14.9%,并检测到新型的O抗原血清型融合类型(O78+O145和O7+O145);ERIC-PCR基因分型鉴定出9种基因型,为A(70%)和B(30%)两个大簇,其中16sr DNA表型和O抗原血清型在ERIC-PCR基因型中均有偏向性,16sr DNA表型中73%分离株聚类于A簇基因型,而血清型中的优势血清型O78,07和O145中70%以上的分离株也聚类于A簇基因型,证实了A簇基因型的大肠杆菌在西南地区的流行优势。3.0毒力基因检测结果、致病力试验结果和药敏试验结果本研究对107株致病性大肠杆菌进行了16种毒力基因检测,检测出11种毒力因子,有三种毒力基因(yij P 96.26%,ibe B 85.98%,omp A 100%)的检出率在85%以上,其中omp A基因的检出率达到100%。在这些检出的毒力基因中,与大肠杆菌的黏附、侵袭和营养摄取密切相关,其中检测出含有大量强致病力的毒力基因,分别为:携带Tsh毒力基因的致病性大肠杆菌(检出率为25.23%);携带耶尔森毒力岛HPI的致病性大肠杆菌(检出率为31.78%);携带est B毒力基因的产肠毒素的致病性大肠杆菌(检出率为31.78%);携带Vat毒力基因的败血症阳性致病性大肠杆菌(检出率为2.8%);携带iuc A毒力基因的致病性大肠杆菌(检出率为44.56%)。根据美国临床和实验室标准(CLSI),将107株致病性大肠杆菌菌液稀释到0.5个麦氏单位,采用Kirby-Bauer纸片扩散法评估分离株的耐药性,结果表明107株致病性大肠杆菌对米诺环素和多粘菌素最为敏感,对氨基糖苷类药物(分别为丁胺卡那,卡那霉素,庆大霉素,新霉素)较为敏感,对大环内酯类药物(麦迪霉素和红霉素)和克林霉素最为耐药,耐药率为100%,对以下抗生素较为耐药,分别为青霉素,苯唑西林,哌拉西林,羧苄西林和氨苄西林(青霉素类药物),耐药率为91%,四环素,多西环素(四环素类药物),耐药率为83%,复方新诺明(磺胺类药物),耐药率为81%。药敏试验结果表明荣昌区、大足区和隆昌市致病性大肠杆菌总体耐药情况严峻,均表现为多重耐药菌,有30%的致病性大肠杆菌表成为7重耐药,随着时间的推移,荣昌区、大足区和隆昌市致病性大肠杆菌的耐药率总体趋势上升。通过致病力分布情况和耐药图谱结合16sr DNA表型分析发现致病性强的分离株其耐药性也强,结合ERIC-PCR基因表型分析发现强致病力和强耐药性的分离株更偏向ERIC-PCR基因型的A簇,证实了A簇基因型大肠杆菌的强致病性。