人工合成抗菌肽对棉花黄萎病菌的抑菌效果

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棉花黄萎病是目前严重制约棉花生产的世界性病害,危害严重。抗菌肽因其杀菌的高效性、广谱性和不易产生耐药性等特点受到广泛关注,在动、植物病害防治方面的研究也日益增多。本研究通过搜索文献及数据库寻找有抗真菌活性的核糖体编码抗菌肽,经过体外抑菌试验筛选到几条能有效抑制棉花黄萎病菌的抗菌肽,筛选到的肽可作为以后的棉花转基因抗病育种的理想的抗源。主要研究结果如下:通过琼脂扩散法和液体生长曲线法对人工合成的多肽进行筛选,最终得到D4E1、D51两条人工肽抑菌活性非常强,在多肽浓度为20μg.mL-1时,几乎能100%地抑制黄萎病菌的菌丝生长和孢子萌发。通过生物信息学软件分析抗菌肽的理化特性和二级结构,发现抗菌肽的疏水活性、正净电荷数,二级结构等理化特性的差异对抑菌活性都有显著的影响,应该作为抗菌肽人工设计时的关键考虑因素。能过反相高效液相色谱保留时间表示的疏水活性和生物软件(ExPASy蛋白质工具ProtParam)分析得到的疏水活性进行了比较,结果表明反相高效液相色谱保留时间表示的疏水活性与抗菌肽的抑菌活性有更好的相关性。采用扫描电镜技术观察D4E1、D51抗菌肽处理后的黄萎病菌孢子及菌丝的形态变化,研究其对真菌超微结构的影响。观察发现,两种抗菌肽都可以破坏真菌细胞膜,但作用方式有所不同。折叠肽D4E1处理孢子后,孢子表面变的粗糙,并开始裂解,有内容物渗出,但未见菌体发生严重变形。而用同样浓度的螺旋肽D51作用后,菌体严重变形,表面皱缩。说明不同类型的抗菌肽对真菌的作用方式和机制不完全相同。抗菌肽结构的多样性决定了其功能和作用方式的多样性。抗菌肽的抗菌机制是一个复杂的过程,不可能用一种模型理论完全解释。因此探讨抗菌肽与棉花黄萎病菌互作机制应综合考虑多种因素。
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