论文部分内容阅读
在中枢神经系统的发育过程当中,雄激素起着十分重要的作用。基于抽动秽语综合征(Tourette’s syndrome,TS)多发于男童、抗雄激素治疗能够显著减轻TS抽动症状、给予外源性雄激素加剧抽动,以及TS患者脑内存在多巴胺能神经体系功能活动增强的事实,推测其发病可能与体内雄激素水平的紊乱导致多巴胺(dopamine,DA)能神经体系的功能障碍有关。因此,本实验通过对发育早期乳鼠皮下注射雄激素制剂-丙酸睾酮,建立高雄激素水平的动物模型;利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)、实时定量PCR以及免疫印迹方法,观察TP处理后雄性大鼠反映中脑多巴胺能神经元功能状态的标志物DA及其分解代谢酶MAOA、MAOB和COMT的表达变化,探讨雄激素对大鼠发育过程中脑DA能神经元功能状态的影响,期望所获结果为TS的发病机制提供一定的实验依据。目的:探讨丙酸睾酮对大鼠发育早期脑内DA及其代谢产物和分解代谢酶表达的影响。方法:将5日龄雄性Wistar乳鼠60只随机分为3组,即3周龄组(3-week)、7周龄组(7-week)和6月龄组(6-month),每组20只。各组乳鼠又分为正常对照组(Con)、丙酸睾酮组(testosterone propionate,TP)、氟他胺组(Flutamide,Flu)、氟他胺预处理丙酸睾酮组(Flu+TP),各5只乳鼠。TP组大鼠从生后第7天开始通过背部皮下注射TP(0.5mg/只),每天一次,持续14天。Flu组大鼠生后第7天开始背部皮下注射Flu(50mg/kg)。Flu+TP组大鼠给药时间和剂量与TP组及Flu组大鼠一致,先给予Flu皮下注射后1小时再给予TP皮下注射。对照组大鼠给予等体积的芝麻油。相应组别大鼠分别在生后3周、7周及6月处死取材。利用LC-MS/MS、实时定量PCR以及免疫印迹观察各组大鼠所取样本DA及其代谢产物DOPAC、HVA和分解代谢酶MAOA,MAOB,COMT的变化。结果:1 LC-MS/MS1.1尾壳核DA及其代谢产物与Con组相比,3周龄TP组大鼠尾壳核DA、DOPAC和HVA的含量显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组大鼠无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低(P<0.01)。与Flu组相比,Flu+TP组大鼠无明显变化(P>0.05)。与Con组相比,7周龄TP组大鼠尾壳核DA、DOPAC和HVA的含量显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低(P<0.01)。与Flu组相比,Flu+TP组大鼠无明显变化(P>0.05)。6月龄各组DA、DOPAC和HVA含量无明显变化(P>0.05)。1.2伏核DA及其代谢产物与Con组相比,3周龄TP组大鼠伏核DA、DOPAC和HVA的含量显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组大鼠无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低(P<0.01)。与Flu组相比,Flu+TP组大鼠无明显变化(P>0.05)。与Con组相比,7周龄TP组大鼠伏核DA、DOPAC和HVA的含量显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低(P<0.01)。与Flu组相比,Flu+TP组大鼠无明显变化(P>0.05)。6月龄各组DA、DOPAC和HVA含量无明显变化(P>0.05)。2实时定量PCR2.1黑质MAOA、MAOB和COMT的m RNA表达与Con组相比,3周龄TP组黑质MAOA、MAOB和COMT的m RNA的表达显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低(P<0.01)。与Flu组相比,Flu+TP组大鼠黑质无明显变化(P>0.05)。与Con组相比,7周龄TP组黑质MAOA、MAOB和COMT的m RNA表达显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低(P<0.01)。与Flu组相比,Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。6月龄各组3种m RNA的表达无明显变化(P>0.05)。2.2腹侧被盖区MAOA、MAOB和COMT的m RNA表达与Con组相比,3周龄TP组腹侧被盖区MAOA、MAOB和COMT的m RNA表达显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组表达显著降低(P<0.05)。与Flu组相比,Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与Con组相比,7周龄TP组腹侧被盖区MAOA、MAOB和COMT的m RNA表达显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低(P<0.05)。与Flu组相比,Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。6月龄各组3种m RNA的表达无明显变化(P>0.05)。3免疫印迹COMT的免疫印迹显示两个条带,一条位于28KDa处为MB-COMT,另一条位于24KDa处为S-COMT。3.1尾壳核MAOA、MAOB和COMT的表达与Con组相比,3周龄TP组尾壳核MAOA、MAOB、MB-COMT和S-COMT的表达显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低(P<0.01);与Flu组相比,Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与Con组相比,7周龄TP组尾壳核MAOA、MAOB、MB-COMT和S-COMT的表达显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低(P<0.01);与Flu组相比,Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。6月龄各组MAOA、MAOB、MB-COMT和S-COMT的表达无明显变化(P>0.05)。3.2伏核MAOA、MAOB和COMT的表达与Con组相比,3周龄TP组伏核MAOA、MAOB、MB-COMT和S-COMT的表达显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低;与Flu组相比,Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与Con组相比,7周龄TP组伏核MAOA、MAOB、MB-COMT和S-COMT的表达显著增加(P<0.01);Flu组及Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。与TP组相比,Flu+TP组显著降低(P<0.01);与Flu组相比,Flu+TP组无明显变化(P>0.05)。6月龄各组MAOA、MAOB、MB-COMT和S-COMT的表达无明显变化(P>0.05)。结论:1丙酸睾酮早期处理增强大鼠幼年及青春期脑内DA、DOPAC及HVA的表达,Flutamide预处理则抑制了外源性TP的这种作用。2丙酸睾酮早期处理提高大鼠幼年及青春期脑内MAOA、MAOB和COMT的表达;Flutamide预处理则抑制了外源性TP的这种作用。