背景脑出血((intracerebralhemorrhage,ICH)是中老年人常见的急性脑血管疾病,具有高病死率和高致残率,是我国脑血管疾病中死亡率最高的临床类型。虽历经多年研究,但至今发病机制不甚清楚,治疗手段有限。近年来研究表明,血肿周围带能量代谢障碍在脑出血继发性损伤中起着重要的作用。脑出血后能量代谢原料的供应中断,引起能量代谢障碍能量物质匮乏,启动脑出血后的损伤级联反应。线粒体作为细胞有氧呼吸和能量供应的场所,其结构和功能受损与脑出血所引起的能量代谢障碍密切相关,同时线粒体功能障碍可启动线粒体凋亡途径诱导的细胞凋亡。由此可见线粒体功能障碍及其诱导的细胞凋亡可能是脑出血的重要致病机制,也有望成为治疗脑出血的重要靶点。越来越多研究显示,Silent information regulator 1(SIRT1)参与体内线粒体功能障碍的修复,并在多种神经退行性疾病中具有一定的神经保护作用。然而SIRT1在大鼠脑出血继发性损伤的保护作用及其可能的调控机制目前尚不清楚。目的探讨sirt1在大鼠脑出血继发性损伤中的神经保护作用及其可能的相关调控机制。方法(1)构建大鼠脑出血模型,于建模后腹腔注射sirt1激动剂srt17205mg/kg/d直至建模后48h。观察激动sirt1对大鼠脑出血后神经学功能、脑水肿含量、形态学的影响,并通过电子显微镜对血肿周围线粒体形态学的观察、线粒体atp和线粒体dna的测定评价激动sirt1对大鼠脑出后继发性线粒体功能障碍的神经保护作用。采用real-timeqpcr和westernblot检查sirt1在大鼠脑出血后核内及总蛋白的表达情况。同时通过westernblot检测ampk及p-ampk的表达情况。(2)于构建大鼠脑出血模型后激动sirt1,采用westernblot检测pgc-1α核内及总蛋白表达水平,线粒体电子传递链相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平。同时采用免疫共沉淀(ip)检测乙酰化pgc-1α的表达水平。(3)构建一条化学合成的阴性对照sirna和三条pgc-1αsirna,建立大鼠脑出血模型,建模前24小时行侧脑室注射sirna,同时于建模后腹腔注射srt1720。采用real-timeqpcr和westernblot检测pgc-1αsirna干扰片段的干扰效率,并选出最有效的pgc-1αsirna干扰片段。检测pgc-1α基因干扰后线粒体电子传递链相关蛋白及线粒体凋亡途径相关蛋白的表达情况。(4)构建一条化学合成阴性对照sirna和三条sirt1sirna,建立大鼠脑出血模型,建模前24小时行侧脑室注射sirna。采用real-timeqpcr和westernblot检测sirt1sirna干扰片段的干扰效率,并选出最有效的sirt1sirna干扰片段。观察sirt1基因干扰后对大鼠脑出血后神经学功能、脑水肿含量、形态学的影响。通过电子显微镜检测血肿周围线粒体形态变化,同时测定线粒体atp和线粒体dna含量。westernblot检测pgc-1α、线粒体电子传递链相关蛋白及线粒体凋亡途径相关蛋白的表达。结果(1)激动sirt1明显缓解大鼠脑出血后神经功能缺失,减少大鼠脑含水量,减少神经细胞损伤,缓解线粒体水肿,增加线粒体atp含量及线粒体dna含量。激动sirt1可引起sirt1总蛋白、sirt1核内蛋白及mrna表达增加。诱导pgc-1α、去乙酰化pgc-1α及线粒体电子传递链相关蛋白表达增高,而凋亡途径相关蛋白表达降低。(2)干扰pgc-1α可抑制由srt1720诱导的pgc-1α及线粒体电子传递链相关蛋白表达增高,同时引起线粒体凋亡途径相关蛋白表达进一步增高。(3)干扰sirt1促进大鼠脑出血后神经功能缺失,增加大鼠脑含水量,增加神经细胞损伤,增加线粒体水肿,减少线粒体atp含量及线粒体dna含量。同时减少sirt1蛋白及mrna表达水平,抑制pgc-1α及线粒体电子传递链相关蛋白表达增高,增加凋亡途径相关蛋白表达。结论SIRT1通过恢复提高线粒体的生物合成(MB),减轻大鼠脑出血继发性线粒体功能障碍及神经细胞凋亡。此神经保护作用可能是通过PGC-1α线粒体途径实现。