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哺乳动物体细胞核移植的研究已开展了多年,但是体细胞克隆效率仍然很低,目前普遍认为体细胞核在受体卵母细胞胞质中不完全的重编程导致了体细胞克隆的低效率。表观遗传学修饰对体细胞克隆胚胎的基因表达与发育命运起着决定性作用。对体细胞核在受体卵胞质中重编程的研究不仅有利于对体细胞克隆技术的完善,也有利于进一步阐明正常的胚胎发育过程及基因调节机制。 研究表明应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatinA,TSA)处理小鼠体细胞克隆胚胎可以显著提高体细胞克隆的效率,受TSA影响的基因不仅有可能是影响体细胞克隆胚胎发育的重要基因也有可能在正常的胚胎发育过程中发挥着重要的作用。本研究建立在小鼠着床前胚胎基因芯片分析的基础上,通过分析比较小鼠经TSA处理的体细胞克隆胚胎、未经TSA处理的体细胞克隆胚胎以及正常受精胚胎的2-细胞期基因表达谱,筛选出6个在经TSA处理的体细胞克隆胚胎和正常受精胚胎中均比在未经TSA处理的体细胞克隆胚胎中表达高的基因,包括C2cd4b、Cd16412、Pthlh、Ogdh、Abcd3、Jam3。通过将双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)注射到小鼠1-细胞期胚胎中进行RNA干扰来研究这些基因在小鼠着床前胚胎发育中的作用,结果显示6种基因的dsRNA均可有效地降低小鼠胚胎中目的基因的表达,但是只有Pthlh表达水平的降低对囊胚形成有显著影响。 PTHLH在调节细胞生长、分化、迁移和凋亡上起重要作用。在发现PTHLH对小鼠囊胚的形成有显著影响后,进一步对PTHLH在卵母细胞和着床前胚胎发育过程中的表达和作用进行了深入研究。研究结果揭示Pthlh在卵母细胞和各发育阶段的着床前胚胎中均表达,在MⅡ期卵母细胞中表达量最高,从2-细胞期开始表达水平降低,在囊胚中的表达量最低。研究结果还表明,通过RNA干扰甲状旁腺激素样激素(PTHLH)在小鼠卵母细胞成熟及着床前胚胎发育过程中的作用降低GV期卵母细胞Pthlh表达水平对小鼠卵母细胞成熟没有影响;通过RNA干扰降低MII期卵母细胞Pthlh水平导致经胞质内单精注射(intracytoplasmicsperminjection,ICSI)构建的显微授精胚胎的囊胚发育率降低;1-细胞期胚胎中Pthlh表达水平的下调也导致囊胚发育率降低,Pthlh表达水平的下调降低了胚胎中多能性基因Oct4和Nanog的表达水平和蛋白水平,也改变了胚胎的组蛋白乙酰化模式。这些结果证明Pthlh表达水平的降低能影响小鼠早期胚胎发育,表明PTHLH在小鼠着床前胚胎发育过程中发挥着重要的作用。本项研究首次证明了内源性PTHLH在小鼠着床前胚胎发育中的作用。