前言 喉作为性激素的靶器官,它与性激素及其受体的关系也备受人们关注。流行病学调查发现,喉癌的发病率男性明显高于女性,男女之比约为7～10:1,而我们在临床上观察到,我们东北地区喉癌有其发病特点,女性喉癌的发病率明显高于我国其它地区及多数国家,进一步观察发现,声门上型喉癌男女之比为1.3:1,而声门型喉癌男女之比为11.8:1,喉鳞癌为什么声门上型女性发病率高?这是否与性激素及其受体有关,目前尚无细致的研究,所以我们想通过实验在这一方面做一些探索和研究。 材料和方法 材料:63例喉癌组织标本、20例癌旁正常组织和20例喉良性病变均取自我院耳鼻咽喉科手术患者。 方法:采用原位杂交法,所有标本自-70℃深度冰箱中取出后,经OCT再次包埋,切成6μm厚的组织切片,置于用APES处理过的载玻片上。室温下放置后,再置于4%多聚甲醛固定液中,用蒸馏水冲洗后干燥。标本取出后,用蒸馏水冲洗后置于30%双氧水、纯甲醇混合液中,室温下处理后蒸馏水洗涤。滴加胃蛋白酶,放置38℃恒温箱中消化,然后用原位杂交用PBS、蒸馏水洗涤。室温下固定标本。切片上滴加预杂交液,38℃恒温箱中放置3小时。之后滴加杂交液,放于38℃恒温箱中过夜。次日取出,37℃左右水温的2×SSC、0.5×SSC、0.2×SSC洗涤,滴加封闭液,38℃恒温箱中放置后滴加生物素化鼠抗地高辛,38℃恒温箱中放置后用原位杂交用PBS洗涤,滴加SABC,38℃恒温箱中放置后用原位杂交用PBS洗涤3次,滴加生物素化过氧化物酶,38℃恒温箱中放置20分钟,原位杂交用PBS洗涤4