大鼠骨性关节炎的软骨细胞模型中ET--1促进MMP1和13的实验研究

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目的:观察并探讨内皮素1(Endothelin-1,ET-1)对骨性关节炎大鼠模型的软骨细胞中上调MMP1、MMP13表达的作用及机制。方法:1.在无菌操作下分离提取大鼠髋关节,在超净台中刮取髋关节表明软骨,并在细胞培养箱中培养软骨细胞,培养成功后在无菌超净台中先用内皮素A型受体(Endothelin-1 receptor A,ETRA)阻断剂BQ123及内皮素B型受体(Endothelin-1 receptor B,ETRB)阻断剂BQ788处理软骨细胞,半小时以后用ET-1试剂处理软骨细胞,并刮取软骨细胞冻存,以备准备免疫蛋白印记。2.用药物处理后各分组为:第一组,对照组(没有加药处理的组);第二组,加入ET-1试剂的ET-1组;第三组,加入ET-1及ETRA阻断剂(BQ123)试剂的BQ123组;第四组,加入ET-1及ETRB阻断剂(BQ788)试剂的BQ788组;第五组,加入ET-1、ETRA阻断剂(BQ123)试剂及ETRB阻断剂(BQ788)试剂的BQ123+788组。3.应用蛋白免疫印记法检测ET-1及其阻断剂处理后软骨细胞的IHH、RUNX2、MMP1及MMP13蛋白的表达。结果:蛋白免疫印记检测结果显示:与对照组比较,软骨细胞经ET-1处理以后IHH、RUNX2、MMP1、MMP13蛋白的表达明显比上调,P<0.05;与ET-1组比较,BQ123组、BQ788组、BQ123+788组的软骨细胞中明显阻断ET-1上调上述蛋白表达结果,分别P<0.05。结论:在ET-1促进骨性关节炎的过程中通过IHH及RUNX2蛋白上调,引起软骨细胞极有可能进一步导致肥大,之后刺激基质金属蛋白酶(MMP)的上升,最后导致骨性关节炎的发生。
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