鸡OC17基因克隆、表达及其Ser61位点对碳酸钙结晶功能研究

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蛋壳破损给企业造成的经济损失不容小觑,破损鸡蛋易受微生物侵染可能对人类健康造成潜在危害。一直以来,如何提高鸡蛋壳品质是国内外家禽育种工作者探讨的问题。蛋壳质量变异影响鸡蛋品质。与蛋壳矿化过程有关的输卵管子宫部基因遗传变异可能是导致蛋壳品质变异的关键因素。蛋壳中特异基质蛋白OC17催化蛋壳多晶乳突体沉积在蛋壳膜上。研究蛋壳矿化的遗传变异是改善蛋壳质量,提高鸡蛋品质的有效途径。探索OC17蛋白对碳酸钙晶体结晶功能为进一步解析OC17基因功能奠定基础。本论文围绕鸡蛋蛋壳强度显著差异的试验群体,运用转录组测序和全基因组重测序研究蛋壳矿化时期影响碳酸钙沉积的关键候选基因及遗传变异;运用转录拼接、RACE、扫描电子显微镜(SEM)等技术对蛋壳特异基质蛋白OC17基因进行基因克隆、表达分析及其Ser61位点对碳酸钙晶体生长的研究。研究结果表明:1、转录组测序发现蛋壳强度差异显著的母鸡子宫部存在889个差异表达基因。对差异表达基因进行GO和KEGG分析发现,这些差异表达基因主要涉及钙离子转运和胞外有机基质蛋白参与的两个生物学过程以及钙离子信号通路、胞外基质蛋白受体互作等生物学通路。其中,16个差异表达基因涉及钙离子信号通路(KO:04020)、14个差异表达基因与胞外有机基质(KO:04512)有关。全基因组重测序结果表明:在蛋白编码基因中获得3,671,519个SNP突变位点,其中低蛋壳强度组和正常蛋壳强度组分别有484,857个和563,437个特有的SNP变异位点。每条染色体的SNPs密度为7.19到9.27个SNP/Kbp,75.61%的SNPs变异位点位于基因内含子中。在蛋白编码基因中获得508,035个Indel变异,其中低蛋壳强度组和正常蛋壳强度组分别有67,925个和76,319个特有的Indel变异,78%的Indel变异位于基因内含子中。CACNA1H基因SNP位点(rs312834462)与蛋壳强度相关。2、运用转录组从头拼接和RACE等技术获得OC17基因cDNA全长序列,共编码161个氨基酸,包括19个氨基酸的信号肽。OC17基因在输卵管子宫部特异表达;与蛋壳质量负相关;随着母鸡生殖器官的发育成熟表达量也随之提高。3、OC17重组蛋白对方解石晶体大小与形态产生影响;OC17蛋白Ser61位点缺失可能延迟方解石晶体<104>晶面形成。本研究获得的潜在遗传突变位点为蛋品质的遗传改良提供了重要的候选分子遗传标记:OC17基因表达与蛋壳质量密切相关;OC17基因重组为进一步研究OC17基质蛋白在蛋壳生物矿化中的功能奠定基础。
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