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背景:骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)具有强大的增殖能力、多向分化潜能、向损伤组织定向修复的功能、低免疫原性和免疫调节作用,其可以用来治疗传统治疗方案难以治愈的疾病。例如,对于帕金森病患者,干细胞移植及基因治疗较传统药物治疗和外科手术有明显的优势;可以抢救心力衰竭患者的干细胞治疗已经在世界范围内引起广泛的关注,诱导性多能干细胞使再生心肌细胞治疗心脏衰竭等成为可能;干细胞在肠道疾病领域,如炎症性肠病、放射性肠炎、克罗恩病、肝移植相关性肠病、肝衰竭等方面取得了突破性进展。干细胞移植具有广阔的临床应用价值,成为人们研究的新热点。对于消化道切除重建术,缺血性胃肠道损伤使得吻合口组织灌注不足,进而导致持续缺氧,伤口感染发生率高、吻合口瘘和愈合缓慢。 目的:观察骨髓间充质干细胞局部注射于大鼠缺血性结肠吻合模型后,在肠黏膜的定植情况及对结肠吻合口愈合的影响,并初步探讨其作用机理。 方法:采用全骨髓贴壁细胞培养法,无菌条件下从SD雄性大鼠股骨和胫骨分离、培养雄性大鼠骨髓间充质干细胞,接种于一次性培养皿。在细胞移植前对细胞表型、细胞活力、增殖能力进行评估。将40只雌性SD大鼠随机分为4组:Group A对照4d组)和Group C(对照7d组),行左侧结肠缺血性肠吻合后,肠黏膜下局部注射一定量的生理血清(胎牛血清,0.5mL);GroupB(骨髓间充质干细胞移植4d组)和Group D(骨髓间充质干细胞移植7d组),行左侧结肠缺血性肠吻合后,取培养至第3代的骨髓间充质干细胞(0.5mL,1×107个细胞)直接肠黏膜下注射移植。分别在各时间点测定术后各组大鼠吻合口爆破压,取吻合口处肠管行羟脯氨酸含量测定,苏木精-伊红染色及Masson染色行组织病理学评分,Y染色体原位杂交检测供鼠来源的骨髓间充质干细胞迁移及定植情况。 结果:1、全骨髓贴壁细胞培养法可靠,培养的骨髓间充质干细胞呈均一梭形,生长状态良好,增殖能力较强,流式细胞鉴定细胞纯度较高;骨髓间充质干细胞具有较强的旁分泌功能,可分泌多种促生长因子;第3代骨髓间充质干细胞培养上清液HGF、VEGF、TGF-β水平分别为(498.42±39.78) pg/mL、(249.90±34.57)pg/mL、(172.28±39.57)pg/mL。 2、术后第4天和术后第7天,骨髓间充质干细胞移植组吻合口爆破压、羟脯氨酸含量均较对照组明显增高,差异具有统计学意义(p<0.05);同样,术后第4天和术后第7天,吻合口处结肠组织病理学特征显示:黏膜坏死、新生血管形成、胶原蛋白沉积量及成纤维细胞活性评分骨髓间充质干细胞移植组与对照组均有明显区别,差异有显著性意义(P<0.05),上皮形成、炎症反应评分,骨髓间充质干细胞移植组和对照组差异无显著性意义(P>0.05);同种异体大鼠骨髓间充质干细胞可在受体缺血性结肠吻合模型肠道内定植,并可加速结肠吻合口的愈合。 结论:1、全骨髓贴壁细胞培养法可靠,培养的骨髓间充质干细胞呈均一梭形,生长状态良好,增殖能力较强,流式细胞鉴定细胞纯度较高,可用来细胞移植。 2、同种异体大鼠骨髓间充质干细胞可在受体缺血性结肠吻合模型肠道内归巢、定植,归巢率较高,并可促进结肠吻合口的愈合。 3、吻合口处骨髓间充质干细胞旁分泌HGF、VEGF、TGF-β等能促进肠上皮细胞增殖、分化,其主要通过促进成纤维细胞活性增加,进而合成、分泌胶原蛋白,并诱导新生血管形成,加速缺血性损伤肠黏膜细胞的更替,增强吻合口张力。