背景：基因组印记是指来自父方和母方的一对等位基因,其中一方发生DNA修饰导致单等位基因表达,发生修饰的基因不表达,未修饰的基因表达。印记基因相当于功能上的单倍体,仅一次突变就使该基因失活,从而导致肿瘤。SLC22A18是位于人类染色体1 1p15.5的父源印记基因,影响细胞生长、胚胎发育。印记基因发生突变或印记异常后使抑癌印记基因活性丧失,促癌印记基因双等位基因表达,基因产物成倍增加,细胞增殖过度促使肿瘤形成,促进肿瘤发展。SLC22A18是成人肺的肿瘤抑制基因和胎儿肾印记性肿瘤抑制基因。本试验的目的是研究SLC22A18基因与乳腺癌生物学行为的相关性,测定SLC22A18在乳腺良性疾病及乳腺癌组织中的表达情况,探讨其与乳腺癌预后的关系。第一部分不同转移力乳腺癌细胞株的SLC22A18表达差异及侵袭能力差异目的：研究SLC22A18在不同转移力的乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7中表达差异,评估此两种细胞株的侵袭能力差异。方法：应用荧光定量逆转录聚合酶链反应方法和蛋白质印记方法检测MDA-MB-231细胞株和MCF-7细胞株的RNA和蛋白质的表达。用transwell方法评估此两种细胞株的侵袭能力。结果：MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞,SLC22A18 RNA和蛋白质表达均有差异。高转移的乳腺癌细胞株MDA-MB-231 SLC22A18表达少,穿过膜的细胞数多,侵袭能力强；低转移的乳腺癌细胞株MCF-7 SLC22A18表达多,穿过膜的细胞数较少,侵袭能力弱。t值为21.0,P=0.004。小结：印记基因SLC22A18可能作为一个抑癌基因影响乳腺癌的侵袭。第二部分SLC22A18过表达稳转细胞株的鉴定及SLC22A18过表达后对细胞侵袭能力的影响目的：建立SLC22A18过表达稳转细胞株(U-231,U-7),并对其进行鉴定。比较稳转株与未处理细胞株侵袭能力(MDA-MB-231, MCF-7)的差异性。方法：SLC22A18过表达稳转细胞株为复旦大学法医学实验室提供。应用蛋白质印记方法鉴定稳转株蛋白质表达情况。用transwell方法评估此稳转细胞株和未处理细胞株侵袭能力的变化。结果：U-231稳转株与对照组MDA-MB-231相比,其SLC22A18蛋白表达明显上调,表达有差异。U-7稳转株与对照组MCF-7相比,其SLC22A18蛋白表达明显上调,表达有差异。高转移力乳腺癌细胞株在SLC22A18表达上调(U-231)后与未处理的MDA-MB-231相比,穿过膜的细胞数减少,分别为25.33个和59.33个,t值为12.424,P值为0.000,差异有统计学意义。小结：U-231,U-7稳转株构建成功,SLC22A18表达上调后,乳腺癌细胞的侵袭能力减弱。在两种不同转移力的细胞株上都有体现。SLC22A18作为一个抑癌基因,上调其表达后,抑癌功能增强,减弱了肿瘤的侵袭能力。第三部分乳腺肿瘤组织中SLC22A18表达水平与临床病理学特征相关性目的：分析乳腺癌的临床病理学特征与SLC22A18蛋白表达量的关系。方法：收集复旦大学附属中山医院普外科2005年1月-2008年3月间住院的194例乳腺肿瘤石蜡标本,其中良性肿瘤38例,乳腺癌156例。用免疫组化法检测SLC22A18蛋白的表达,用计算机图像分析软件检测计算肿瘤标本中SLC22A18蛋白表达的相对量。根据患者病理学特征进行分组。采用软件SPSS17.0对数据进行统计分析,评价SLC22A18表达与乳腺癌生物病理学特征的相关性。结果：1)乳腺良性肿瘤中SLC22A18表达水平明显高于乳腺癌组织。2)SLC22A18表达水平与乳腺癌患者的患病年龄无关。3)SLC22A18表达水平与乳腺癌肿瘤大小呈负相关。肿瘤直径小于2cm组的SLC22A18表达水平高于肿瘤直径2-5cm组和大于5cm组,肿瘤直径2-5cm组的SLC22A18表达水平高于大于5cm组,差异有统计学意义。4)无脉管内癌栓的癌组织中SLC22A18表达水平高于有脉管内癌栓组。5)SLC22A18在有淋巴结转移的乳腺癌中表达水平较低。以乳腺癌淋巴结转移个数(pN区域淋巴结病理分期)分组,无淋巴结转移组的SLC22A18表达水平高于淋巴结转移1-3个组和10个以上组,差异有统计学意义,有淋巴结转移的各组间肿瘤组织的SLC22A18表达水平差异无统计学意义。6)以乳腺癌患者的雌孕激素受体和HER-2的免疫组化指标为分组指标,ER,PR及HER-2各自的分组中的SLC22A18表达水平差异无统计学意义。7)乳腺癌SLC22A18表达水平与肿瘤分化程度、肿瘤类型无明显关系。8)SLC22A18表达水平随临床TNM分期的增加而递减。结论：乳腺良性肿瘤组织中SLC22A18表达水平明显高于乳腺癌,且随着乳腺癌的临床分期和恶性程度的增高,SLC22A18的表达明显下降,并且在癌发生淋巴转移后SLC22A18表达下降更明显。第四部分SLC22A18表达水平在乳腺癌预后价值的研究目的：研究印记基因SLC22A18是否与乳腺癌患者术后复发转移相关,鉴定SLC22A18是否能作为一个独立的预后因子预测乳腺癌患者的复发转移。方法：对所有石蜡标本患者进行术后随访,记录首次出现复发转移的时间、无病生存时间和总生存时间。以免疫组化所测得的SLC22A18表达的相对量的中位数将所有病例分组。采用软件SPSS17.0统计分析。用Kaplan-Meier方法分析患者复发转移的情况；用log-rank检验比较患者无病生存分布。用寿命表法估计各分组患者的1年、2年的无病生存率。COX模型进行多因素回归分析,辨认预测预后的因素。结果：生存分析Kaplan-Meier累积生存函数图和log-rank检验表明SLC22A18低表达组的术后无病生存时间少于高表达组。Cox Regression风险比例模型分析SLC22A18低表达组和高表达组的术后复发转移的相对危险度为2.624：1。COX模型多因素回归分析结果提示SLC22A18分组和组织学分级与乳腺癌复发转移相关,SLC22A18低表达组复发风险是高表达组的2.624倍,组织学分级高组复发风险是组织学分级低组的2.065倍。小结：乳腺癌原发灶的SLC22A18表达水平与患者的预后相关,SLC22A18高表达的乳腺癌患者术后的复发转移风险较小。SLC22A18作为抑癌基因参与乳腺癌的发病过程,检测SLC22A18的表达有助于乳腺癌预后的判定。