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本试验以BALB/C小鼠为研究对象,采用光镜、电镜、流式细胞术、免疫组化等技术检测小鼠胸腺大小、显微结构、超微结构、胸腺细胞凋亡率、胸腺中Ghrelin及其受体的定位分布,初步探讨了外源性Ghrelin对雌激素诱导小鼠胸腺细胞凋亡和胸腺中Ghrelin及其受体分布的影响。本研究共分为3部分内容:
1、雌激素诱导小鼠胸腺细胞凋亡。选用SPF级5周龄雌性BALB/c小鼠40只,适应性饲养一周。实验分为2组:(1)雌激素组,按0.1mg/kg体重隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇2周;(2)生理盐水组,按相同剂量隔日腹腔注射生理盐水2周。于最后一次注射2d后取材,测量小鼠胸腺大小、胸腺指数,观察胸腺显微结构、超微结构和胸腺细胞凋亡情况。结果表明,胸腺大小雌激素组明显小于生理盐水对照组;胸腺指数雌激素组极显著小于生理盐水对照组(p＜0.01);胸腺细胞凋亡率雌激素组极显著高于生理盐水对照组(p＜0.01)。由此可知,雌激素有致小鼠胸腺细胞凋亡的作用。
2、Ghrelin.对雌激素诱导小鼠胸腺细胞凋亡的影响。选用SPF级5周龄BALB/C雌性小鼠80只,适应性饲养一周。实验分为4组:雌激素+Ghrelin组、雌激素+生理盐水组、生理盐水组、空白对照组。(1)雌激素+Ghrelin组先隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇(0.1mg/只)2周,再采用相同方法注射Ghrelin(120μg/只)2周;(2)雌激素+生理盐水组先注射苯甲酸雌二醇2周,再采用相同方法注射生理盐水2周;(3)生理盐水组注射生理盐水4周;(4)空白对照组不注射任何试剂。于最后一次注射2d后取材,测定小鼠胸腺大小、胸腺指数,观察胸腺显微结构、超微结构和胸腺细胞凋亡情况。结果表明,胸腺大小雌激素+Ghrelin组明显大于雌激素+生理盐水组;胸腺指数雌激素+Ghrelin组极显著大于雌激素+生理盐水组(p＜0.01);雌激素+Ghrelin组胸腺显微结构和超微结构基本恢复正常,与生理盐水组和空白对照组相似,胸腺细胞凋亡率极显著小于雌激素+生理盐水组(p＜0.01),而与生理盐水组和空白对照组均差异不显著(p＞0.05)。由结果可知,Ghrelin可以通过抑制胸腺细胞凋亡和促进胸腺细胞增殖,从而逆转雌激素诱导的小鼠胸腺萎缩。
3、外源性给予雌激素和Ghrelin对小鼠胸腺Ghrelin及GHS-R分布的影响。外源性给予雌激素后,小鼠胸腺中Ghrelin及GHS-R主要分布在胸腺细胞的细胞核,胸腺上皮细胞及成熟T细胞;雌激素组Ghrelin免疫阳性细胞的平均灰度值与生理盐水对照组差异不显著(p＞0.05),而GHS-R免疫阳性细胞的平均灰度值极显著小于生理盐水对照组(p＜0.01)。外源性给予Ghrelin后,Ghrelin及GHS-R主要分布在胸腺细胞的细胞核,胸腺上皮细胞及成熟T细胞;雌激素+Ghrelin组Ghrelin免疫阳性细胞的平均灰度值与雌激素+生理盐水组差异不显著(p＞0.05)但极显著小于生理盐水组和空白组(p＜0.01),雌激素+Ghrelin组GHS-R.免疫阳性细胞的平均灰度值极显著小于雌激素+生理盐水组(p＜0.01),并且也极显著小于生理盐水组和空白组(p＜0.01)。上述结果表明,外源性雌激素和Ghrelin对Ghrelin的分布影响较小,但都显著影响GHS-R在小鼠胸腺中的分布,使GHS-R免疫阳性细胞反应增强。