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实验目的：原发性胰腺癌约占全身恶性肿瘤的1%-2%。近年来,胰腺癌的发病率逐年上升。于此同时,尽管在胰腺癌的影像诊断、肿瘤标志物、治疗方法等诸多领域已有突出进展,但胰腺癌预后仍不乐观。术后疗效不佳主要归因于：术后1-2年内的局部复发、肿瘤肝转移或二者并发。辅助治疗有助于提高远期生存率,尤其对于因肿物浸涧腹膜后隙及肠系膜上动脉的患者,化疗仍可作为可选择的治疗手段。到目前为止,种类繁多的化疗方案仍没有将患病生存期的有效改观,最长中位生存时间在4-9个月之间,而且有效率较低。因此,和其他种类的胃肠道恶性肿瘤比较,胰腺癌是最具化疗抗药性的肿瘤之一。为了开发出对胰腺癌治疗更加有效的药物,对于胰腺癌耐药机制的研究已经非常急迫。现有研究结果表明：在人类肿瘤细胞中,参与MDR(mutidrug resistance,多重耐药)的主要是ABC转运蛋白家族。其成员主要包括：ABCB家族(包括MDR1即P糖蛋白)、ABCC家族(包括MRP-1-MRP-9蛋白)以及新近发现的ABCG家族(包括ABCG2蛋白等)。其中ABCB家族蛋白发现较早、论述较多,而对ABCC和ABCG蛋白家族在胰腺癌领域的研究却十分有限,而且存在部分结果相互矛盾,本实验将对“胰腺癌组织中ABCG2、MRP-1的表达及临床意义”作进一步研究分析。以为临床用药个体化、抗癌药物选择、及特异性MDR抑制剂因子类药物的使用提供理论依据。材料与方法：本试验所用标本均来自中国医科大学附属盛京医院普外科2003年至2009年间手术切除的胰腺肿瘤转移灶及转移淋巴结和外伤及十二指肠癌手术切除的胰腺组织标本。所有标本均有详细临床资料,均为初发病例,手术前未接受放疗、化疗等抗肿瘤治疗。胰腺肿瘤组共80例,年龄范围50-70岁,平均55岁；高分化26例中分化20例低分化23例良性11例。外伤组织和十二指肠癌手术切除的胰腺18例作为正常对照组,年龄范围为50-70岁。所有标本经10%中性福尔马林液固定,常规石蜡包埋,4 um厚切片编号备用,连续切片2张,两张分别行ABCG2、MRP-1免疫组化染色。操作严格按试剂盒说明进行,光镜观察、照相、计数十个高倍镜视野下的阳性染色细胞。计算阳性细胞率和平均阳性细胞数,描述ABCG2、MRP-1阳性细胞在癌组织中分布情况。由两名病理科医师在不知病例临床资料的情况下独立阅片,结果不一致时,采取协商统一原则。将肿瘤分化程度分三级加良性。ABCG2、MRP-1均为跨膜蛋白,阳性表现为胞膜染成高出背景色的棕黄色。完成染色后于400x光镜下读片,评估ABCG2及MRP-1的阳性细胞在癌组织中分布情况,有无分布规律特点。多个病理级别之间的阳性细胞率比较采用x2检验,均数的多重比较采用q检验,两均数比较采用t检验,采用spearman法进行组间相关分析。所有结果均在SPSS13.0统计软件包中实现。实验结果：1、ABCG2、MRP-1蛋白在胰腺癌、良性胰腺肿瘤和正常胰腺组织中的表达ABCG2蛋白的阳性表达特征为在细胞膜或胞质中出现棕黄色颗粒,极少数出现明显的粗大粒状。其在胰腺癌中的表达不均匀并有较明显的异质性,可成剧照或分散分布,在胰腺癌细胞中其阳性率为53.62%(37/69),而在正常胰腺组织中其阳性率仅为16.67%(3/18),且为局灶分布,两者比较差异显著(P=0.005)；比较胰腺癌和胰腺良性肿物的ABCG2阳性表达率,发现在良性肿物(切片病理证实全部为胰腺实性乳头状瘤)其阳性率为18.18%(2/11),同样具有统计意义(P=0.0289)；根据肿瘤大小,以直径2cm为标准将胰腺癌标本分成两组,在肿瘤大于2cm组中ABCG2的阳性率为60.78%(31/51),而小于2cm组为33.33%,提示该蛋白与肿块大小相关(P=0.045)。而对其他因素的相关分析中发现,其与肿瘤病理分期(高中低分化)、临床UICC分期和是否有淋巴结无关。MRP-1蛋白位于癌细胞的胞浆和胞膜上,呈均匀已知的棕黄色小颗粒。在胰腺癌细胞中其阳性率为62.32%(43/69),而在正常胰腺组织中其阳性率仅为27.78%(5/18),两者比较差异显著(P=0.009)；比较胰腺癌和胰腺良性肿物的ABCG2阳性表达率,发现在良性肿物(切片病理证实全部为胰腺实性乳头状瘤)其阳性率为18.18%(2/11),同样具有统计意义(P=0.006)；根据肿瘤大小,以直径2cm为标准将胰腺癌标本分成两组,在肿瘤大于2cm组中ABCG2的阳性率为70.59%(36/51),而小于2cm组为38.89%,提示该蛋白与肿块大小相关(P=0.017)；在按病理分期将标本分成高中分化和低分化两组后,其阳性率分别为71.74%和43.48%,提示MRP-1蛋白在不同分期肿瘤肿瘤中表达具有差异(P=0.022)；而对其他因素的相关分析中发现,其与临床UICC分期和是否有淋巴结无关。2.ABCG2、MRP-1表达的相关性及其意义将实验中69例胰腺癌标本按ABCG2蛋白表达情况分为两组,看MRP-1蛋白的表达是否具有差异。69例胰腺癌标本中,ABCG2阳性者37例,其中MRP-1阳性28例,阳性率75.68%；ABCG2阴性者32例,其中MRP-1阳性15例,阳性率46.86%,其表达具有差异(P=0.013)。经spearman秩合分析,提示MRP-1和ABCG2表达呈正相关(rs=0.489,P=0.044)。本研究提示：1.在人类病理标本中,ABCG2在胰腺癌、正常胰腺和胰腺肿瘤中表达具有差异,这一点提示ABCG2参与了胰腺癌的MDR的发生2.ABCG2蛋白与肿块大小相关(P=0.045),此结果可能提示ABCG2对胰腺癌预后不良具有提示意义。3. ABCG2和MRP-1蛋白表达明显相关。4.初步补充和验证两种蛋白的SP实验中表达特点：本实验对于ABCG2在胰腺癌病理标本中表达特征描述为“在细胞膜或胞质中出现棕黄色颗粒,极少数出现明显的粗大粒状。不均匀并有较明显的异质性,可成局灶或分散分布”；MRP-1的表达特点为“位于癌细胞的胞浆和胞膜上,呈均匀已知的棕黄色小颗粒”。