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目的:利用快速高分辨率液相色谱/高分辨飞行时间质谱联用仪(RRLC-QTOF/MS)血浆代谢组学技术对不稳定型心绞痛和动脉粥样硬化患者进行对比研究,同时比较不稳定型心绞痛和正常对照间的血浆代谢模式差异,试图寻找出对正确诊断不稳定型心绞痛具有临床价值的生物标志物,也为深入研究不稳定型心绞痛发生、发展机制提供科学依据。 方法:通过优化血浆样本预处理方法和RRLC-QTOF/MS仪器的相关参数,建立适用于本研究的血浆代谢组学方法。通过反复检测血浆质控样品,考察建立的分析方法的精密度和稳定性。利用RRLC-QTOF/MS仪器检测获得不稳定型心绞痛及其对照(动脉粥样硬化和正常对照)的血浆代谢指纹图谱。采用XCMS软件包对获得的原始数据进行数据预处理,利用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)方法研究不稳定型心绞痛及其对照之间的血浆代谢模式的差异,并根据PLS-DA模式得到的变量重要性评分(VIP)和单变量分析法算得的P值筛选出潜在的生物标志物。利用保留时间、一级谱图和二级谱图信息与网上代谢物数据库等进行代谢物化学结构鉴定。针对找到的生物标志物为切入点,检索国内外相关代谢途径数据库或有关的文献,逆向探索该生物标志物的代谢途径或生物学功能。 结果:建立了血浆预处理方法,分别优化了色谱条件以及正负离子两种模式下的质谱参数,建立适用于血浆代谢组学分析的RRLC-QTOF/MS方法。系统考察了建立的分析方法的精密度和稳定性,两者效果均良好,能够保证获得数据的可靠性。不稳定型心绞痛与动脉粥样硬化的血浆代谢组学研究发现,经过PLS-DA分析表明不稳定型心绞痛与动脉粥样硬化患者的血浆样品具有明显的分类效果,并筛选和鉴定了16个对不稳定型心绞痛诊断具有潜在意义的生物标志物。基于交()的RF模式判()果《显示,此16个内源性生物标志物的区分度AUC()09143。不稳定型心绞痛与正常对照的血浆代谢组学研究表明,不稳定型心绞痛患者和正常对照能够被准确地区分,两者在血浆代谢模式上存在明显的差异。本研究共筛选和鉴定出17个生物标志物。在这些潜在生物标志物中,有12个代谢物同不稳定型心绞痛组与动脉粥样硬化组比较的结果一致,这些代谢物极有可能成为新的不稳定型心绞痛生物标志物。 结论:基于RRLC-QTOF/MS建立的代谢组学方法精密度和稳定性良好,适用于大批量的血浆样品检测。基于RRLC-QTOF/MS的血浆代谢组学能准确地区分不稳定心绞痛和动脉粥样硬化/正常对照。在不稳定心绞痛患者的血浆中观察到磷脂、色氨酸、类固醇和叶酸等物质发生异常代谢,这些潜在的生物标志物与炎症、凋亡、斑块不稳定和血小板聚集有关。