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激活素A (Activin A, Act A)是TGF-β超家族成员之一,在哺乳动物卵泡发生过程中发挥了重要的作用,调控着卵泡发育不同阶段相关基因的表达。近年的研究主要是关注在ActA参与调节卵泡的成熟和黄体化等方面,而ActA调节颗粒细胞增殖的研究鲜有报道。鉴于此,本研究着重探讨了ActA调节颗粒细胞增殖的信号通路及其作用机制。利用12-14日龄小鼠腔前卵泡颗粒细胞体外培养,研究Act A与颗粒细胞增殖的关系。经BrdU标记分析发现：在体外培养颗粒细胞过程中,在培养液中添加100ng/mL Act A, Act A实验组颗粒细胞增殖比例极显著地高于对照组(P<0.001)。通过免疫组织化学检测发现,TGF-β信号通路关键蛋白SMAD3在小鼠卵泡颗粒细胞中特异表达。另外,过表达Smad3的定量RT-PCR和Western blot结果皆显示,其对颗粒细胞的增殖作用与ActA具有相一致的趋势。研究还发现,在ActA存在的情况下,NOTCH2和HEY2的蛋白表达量极显著上调(P<0.01)。而颗粒细胞中过表达Smad3后, Notch2和Hey2在mRNA水平上的表达也极显著升高(P<0.01)。在颗粒细胞培养过程中添加Notch信号通路抑制剂DAPT,培养3d或5d后,DAPT极显著抑制了颗粒细胞的增殖(P<0.01),而通过添加Act A或过表达Smad3可以缓解这种抑制作用。经CoIP和ChIP结果分析发现,SMAD3与ICN形成复合物作为转录因子结合到Notch靶基因启动子区,参与基因的调控从而影响颗粒细胞的增殖。综上所述,ActA可以通过TGF-β信号通路来促进卵泡颗粒细胞增殖,并且TGF-β和Notch信号通路在增殖的过程中存在着直接的关联作用。