背景非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的一种极为重要且极具代表性的进展形式,以肝脏脂肪沉积和炎症为主要特征。现有研究表明衰老是NASH的重要影响因素之一。而熊果酸(UA)能够有效地改善啮齿类动物脂质代谢异常和炎症反应。然而,UA与衰老相关NASH的关系却鲜有研究。目的观察UA对老年大鼠NASH的改善作用,并从组织形态学、血浆和组织的生化指标检测、蛋白基因水平检测、组学分析等角度进一步探讨其可能的作用机制。方法将25只22月龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为老年对照组(Aged,9只)、UA低剂量组(UA-L,10 mg/kg,8只)和UA高剂量组(UA-H,50 mg/kg,8只)。另取3月龄青年雄性SD大鼠作为青年对照组(Young,8只)。标准饮食饮水,于动物饲养中心常规饲养一周后,依照每公斤体重5m L的药物体积给予对应浓度UA灌胃,每天灌胃一次,持续7周。在第6周末,进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT)。并于第7周末动物禁食不禁水过夜后,处死收集组织样本并称重。采用ELISA方法检测血浆游离脂肪酸(NEFA)和胰岛素水平;用酶法检测血浆谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和葡萄糖含量;采用油红O染色法和HE染色法观察肝脏脂质沉积及组织形态学的变化;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)、Western blot和免疫组织化学法等多种方法检测肝脏基因和蛋白的表达情况。应用蛋白质组学和代谢组学技术探索UA改善衰老相关NASH可能的潜在靶点。体外实验采用Hep G2细胞和RAW264.7细胞,以油酸(OA)干预建立体外模型。实验分组:正常对照组(Con)、模型组(OA)和用药组(UA),采用Western blot和免疫荧光等方法检测相关蛋白的表达。结果UA能够显著降低自然衰老大鼠血浆的TG和胰岛素水平、HOMA-IR指数,并且有效减少肝脏TG含量、肝脏油红O染色面积以及肝脏炎性细胞的聚集,这表明UA对大鼠衰老相关NASH有一定的改善作用。通过对各组大鼠肝脏蛋白质组学数据进行基因本体(GO)功能分析,我们发现,UA逆转的自然衰老大鼠肝脏的差异蛋白显著集中在免疫系统过程、免疫反应、防御反应、白细胞迁移和白细胞趋化性等GO term中。在这些GO term所包含的差异蛋白中,我们选择了差异最为显著的S100A8和S100A9蛋白进行下一步的探索。有文献报道,S100A8/A9可以携带花生四烯酸(AA)至靶细胞,并激活核因子(NF)-κB促炎信号通路。值得注意的是,代谢组学结果分析发现,UA逆转了老年大鼠肝脏AA的高表达。体外实验结果显示,UA可以逆转OA诱导的Hep G2细胞和RAW264.7细胞中脂质沉积以及S100A8、S100A9、NF-κB和IL-10的表达。结论UA能够改善自然衰老大鼠肝脏的脂质沉积、胰岛素抵抗(IR),缓解NASH,其机制可能与其调节肝细胞、巨噬细胞中S100A8/A9的合成与分泌、及S100A8/A9-AA刺激的下游NF-κB炎症反应通路有关。