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目的慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia, CLL)是西方国家最常见的白血病类型,占成人白血病的1/3,我国发病率低于西方国家,但随着人口老龄化,CLL发病有逐年增加的趋势。DEK基因位于染色体6p22.3,在增殖期的细胞和肿瘤细胞中表达,最早在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)中发现t(6;9),随之发现DEK可能与肿瘤形成有关,主要参与干扰细胞分裂、DNA修复、抑制细胞分化、衰老和凋亡。近几年在多种肿瘤中发现DEK基因高表达,在CLL中也有报道,且其致癌性可能与影响p53基因功能相关,本研究主要探讨CLL中DEK基因mRNA表达水平及其临床意义。方法采用实时定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, qRT-PCR)技术、SYBR Green荧光染料法检测65例CLL患者外周血淋巴细胞中DEK基因表达水平,运用循环阈值(cycle threshold, Ct)比较法进行mRNA表达相对定量分析,上述基因的相对表达量以公式2(-△Ct)表示,其中△Ct=Ct目的基因- Ct对照基因。应用统计软件SPSS17.0对数据进行统计分析,不同分组间基因表达水平的差异采用Mann-Whitney U检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果①65例CLL患者外周血淋巴细胞中DEK的mRNA表达水平中位数为6.792×10-2 (1.438×10-2~3.201×10-1)。②DEK表达水平在年龄≥60岁与<60岁(P=0.773)、临床分期较早(Binet A期)与临床分期较晚(Binet B期、C期)(P=0.612)、血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH) (P=0.115)和β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG) (P=0.330)水平增高与正常患者,以及ZAP-70表达阳性与阴性(P=0.552)患者之间无显著性差异;CD38表达阳性患者的DEK表达水平显著高于阴性患者(P=0.047);荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术检测发现,存在del(13q14)、+12、免疫球蛋白重链(immunoglobulin heavy chain, IgH)易位及del(11q22.3)异常的患者与无上述异常的患者相比无显著性差异(P值分别为0.159、0.546、0.883、0.498),具有del(17p13)异常的患者,其DEK水平显著高于无del(17p13)异常的患者(P=0.006);具有p53基因突变患者的DEK表达水平与无p53基因突变患者相比无显著性差异(P=0.655);免疫球蛋白重链可变区(immunoglobulin heavy chain variable region, IgVH)无突变患者的DEK表达水平显著高于IgVH突变患者(P=0.025)。结论DEK表达水平与p53基因缺失及IgVH突变状态有关。DEK的表达水平可能与CLL患者的预后相关。目的慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia, CLL)是一种异质性的恶性血液病,而化疗效果在一定程度上决定了患者的预后,氟达拉滨为目前治疗CLL常用药物,通过拮抗嘌呤代谢引起DNA损伤从而激活p53基因,使CLL细胞进入线粒体凋亡途径从而发挥其抗肿瘤作用。Nutlin-3是一种有效的选择性的鼠双微体2(murine double mimute 2, MDM2)拮抗剂,通过拮抗MDM2活化野生型p53通路。本研究使用氟达拉滨活性物质(F-ara-A)及Nutlin-3体外刺激CLL细胞,探索DEK在p53依赖的凋亡途径中的作用及地位。方法无菌分离26例CLL患者外周血中的CLL细胞进行体外培养,设立含有3.5μM氟达拉滨、Nutlin-3 10μM的实验组及不含药物的对照组,经过24h培养后收集细胞。流式细胞术检测膜联蛋白V(annexin V) -FITC/碘化丙啶(propidium iodide, PI)以明确凋亡程度;SYBR Green荧光染料法的实时定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, qRT-PCR)方法检测DEK的表达水平;间期荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术检测毛细血管扩张性共济失调症突变(ataxia-telangiectasia mutated, ATM)基因和p53基因缺失;PCR联合DNA序列测定检测免疫球蛋白重链可变区(immunoglobulin heavychain variable region, IgVH)基因突变和p53基因突变;流式细胞术检测CLL细胞内p53/p21蛋白水平以明确p53基因的功能状态。应用统计软件SPSS17.0对数据进行统计分析,实验组与对照组CLL细胞间凋亡水平及基因表达水平的差异性用配对t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果①CLL细胞分离时的中位凋亡率为8.62% (1.83%~36.28%),单纯体外培养24h凋亡率为19.23% (7.96%~55.94%),单纯体外培养24h后CLL细胞的自发性凋亡明显增加(P=0.004);经氟达拉滨和Nutlin-3刺激24h后凋亡率分别为40.85% (4.59%~75.31%)和42.82% (18.11%~79.71%),氟达拉滨和Nutlin-3诱导的凋亡较对照组均显著增加(P<0.001和P<0.001);②8例CLL细胞经氟达拉滨刺激前后p21蛋白水平无变化,提示p53功能异常。3例存在ATM基因杂合性缺失的CLL细胞经氟达拉滨刺激后,2例胞浆中p21蛋白表达明显升高,提示p53功能正常;③实验组CLL细胞经氟达拉滨和Nutlin-3刺激24h后,p53功能正常的CLL细胞的DEK水平均明显低于对照组(P=0.042和P=0.038);具有p53功能异常的CLL细胞经氟达拉滨和Nutlin-3刺激24h后,与对照组相比,其DEK的表达水平均无明显变化(P=0.834和P=0.477);④实验组CLL细胞经氟达拉滨和Nutlin-3刺激24h后,无p53基因缺失的CLL细胞的DEK水平明显均低于对照组(P=0.017和P=0.029);具有p53基因缺失的CLL细胞经氟达拉滨和Nutlin-3刺激24h后,与对照组相比,其DEK的表达水平均无明显变化(P=0.111和0.378);⑤实验组CLL细胞经氟达拉滨和Nutlin-3刺激24h后,无p53基因突变的CLL细胞的DEK水平均明显低于对照组(P=0.037和P=0.017);具有p53基因突变的CLL细胞经氟达拉滨和Nutlin-3刺激24h后,与对照组相比,其DEK的表达水平均无明显变化(P=0.263和P=0.378)。结论氟达拉滨和Nutlin-3均可有效的诱导CLL细胞凋亡。p53缺失和/或p53突变均可导致p53功能异常,但ATM基因杂合性缺失的CLL细胞仍具有正常的p53功能。DEK表达水平的下调依赖于正常的p53基因。