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本文利用体外的鲫鱼原代培养肝细胞模型,研究了壬基酚对肝细胞增殖、氧化胁迫和抗氧化酶系的体外毒性效应,同时建立了检测肝细胞卵黄蛋白原表达的间接酶联免疫吸附测定技术,以卵黄蛋白原为反映内分泌干扰物暴露程度的生物标志物,研究了壬基酚和双酚A的单一雌激素效应,并在得出两者单独作用EC50值的基础上,运用水生毒理联合毒性相加指数法对联合作用的性质进行评价。
第一部分:体外培养的原代鲫肝细胞在不同浓度的壬基酚作用后,以可溶性噻唑盐WST-8法检测细胞存活率,检测细胞培养液中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量,抗氧化系统中抑制羟自由基(·OH)的能力以及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性,研究了壬基酚对细胞的毒性作用、氧化损伤以及这些氧化应激指标随壬基酚浓度和作用时间的变化。结果显示,1本实验中不同浓度的壬基酚均能抑制肝细胞的增殖,并且高浓度范围内的细胞与对照组相比其增殖能力显著下降;2倒置显微镜的细胞形态观察表明,高浓度组(10-3mol/L)的壬基酚对细胞产生了明显的细胞毒性,与对照组相比,该试验组的细胞形态发生了明显的改变;3壬基酚破坏了抗氧化系统的平衡,经壬基酚处理后原代培养肝细胞,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(CAT)的活性均受到抑制,并且羟自由基的含量升高;4壬基酚也能对原代培养肝细胞造成氧化损伤,引发脂质过氧化物MDA的形成。
第二部分:对检测鱼类原代培养肝细胞中卵黄蛋白原含量变化的ELISA技术的各种参数包括标准曲线的工作范围、抗体稀释度和孵育时间等进行了优化,从而建立了一个实用、灵敏的检测体系。
第三部分:利用建立的间接EHSA技术检测NP和BPA对鲫鱼肝细胞的单一雌激素效应。
第四部分:检测壬基酚和双酚A诱导的联合雌激素效应,运用Marking水生毒理联合毒性相加指数法对联合作用的性质进行评价。