【摘 要】
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背景:心肌肥厚是引起心血管病患病和死亡的主要危险因子。FHOD3是主要在心脏表达的肌动蛋白成核因子,基础状态下其分子内N端与C端相结合,处于自抑制结合状态。C末端的磷酸化是其解除自抑制状态的机制之一,是否有其他激活机制有待进一步研究。研究发现FHOD3在肥厚性心肌病患者中表达增加,但其C末端的磷酸化在心肌肥厚病理发生中的作用仍不清楚。目的:探讨FHOD3的分子激活机制及其C末端磷酸化修饰在心肌肥厚
【基金项目】
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国家自然科学基金（30871082）；
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背景:心肌肥厚是引起心血管病患病和死亡的主要危险因子。FHOD3是主要在心脏表达的肌动蛋白成核因子,基础状态下其分子内N端与C端相结合,处于自抑制结合状态。C末端的磷酸化是其解除自抑制状态的机制之一,是否有其他激活机制有待进一步研究。研究发现FHOD3在肥厚性心肌病患者中表达增加,但其C末端的磷酸化在心肌肥厚病理发生中的作用仍不清楚。目的:探讨FHOD3的分子激活机制及其C末端磷酸化修饰在心肌肥厚发生过程中的可能作用。方法:1)构建可能含C末端核心模体与N端自抑制区的氨基酸片段,体外沉降实验鉴定C末端核心模体区域。2)构建模拟包含FHOD3 C末端核心模体的不同磷酸化状态的片段,沉降试验观察C末端不同磷酸化状态对其自抑制结合的影响、放射自显影法鉴定引起C末端磷酸化可能的蛋白激酶。3)转染模拟C末端不同磷酸化状态的FHOD3突变体至COS-1细胞中,观察其对应力纤维生成的影响。4)AngⅡ刺激成年大鼠心肌细胞,Western Blotting检测FHOD3的含量及C末端的磷酸化的改变。5)腹主动脉缩窄造成心肌肥厚动物模型,Western Blotting检测FHOD3的含量及C末端的磷酸化的改变。结果:（1）沉降实验发现,FHOD3的DAD结构域核心模体所在位置位于1376-1439位的氨基酸片段中,DID结构域位于2-411位的氨基酸片段中;（2）FHOD3 C末端三个磷酸化位点的磷酸化是其激活机制之一;（3）FHOD3 C末端磷酸化位点能被c GMP依赖性蛋白激酶（PKG）、ROCK1、ROCK2磷酸化,其中PKG能磷酸化FHOD3属首次发现;（4）FHOD3分子存在小GTP水解酶结合位点,能同时结合两种小G蛋白（Rho A和Rac1）,这属首次发现。（5）FHOD3C端磷酸化后可促使COS-1细胞内应力肌丝的生成。（5）AngⅡ刺激成年大鼠心肌细胞后FHOD3 C端磷酸化水平增加。（6）心肌肥厚的动物模型中发现FHOD3蛋白表达水平及其C端磷酸化水平都有增加。结论:FHOD3 C端磷酸化是其激活机制之一,其C端磷酸化修饰参与心肌肥厚发生过程。
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