桑白皮指纹图谱及血清药物化学初步研究

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中药桑白皮为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮。性甘,微苦、寒,归肺经,具有泻肺平喘,利水消肿之功效。临床用于肺热咳嗽,水肿胀满尿少,面部皮肤水肿。目前桑白皮的研究集中在化学成分、药理作用方面,而对桑白皮药材指纹图谱研究较少,为了更好地建立和完善桑白皮药材质量标准,本课题通过HPLC指纹图谱方法的研究,以达到桑白皮药材的定性鉴别和质量控制的目的。通过桑白皮药材血清药物化学的初步研究,揭示桑白皮的药效物质基础,采用LC-MS法鉴定入血成分,从而寻找和确定定量指标性成分,更加科学地控制药材质量,为桑白皮的合理应用、新药研发及临床用药提供科学依据。具体内容分为以下三个部分:  1.建立桑白皮药材 HPLC指纹图谱:本研究通过实验筛选,确定了供试品溶液的制备方法与样品的HPLC指纹图谱色谱条件,用两种不同的方法进行了精密度、重复性和稳定性的验证试验,结果其RSD均小于3.0%,测定14批样品的指纹图谱,确定了23个共有峰,相似度高,所得高效液相色谱图特征性与专属性强。用超高效液相色谱-二极管阵列-质谱联用仪(UPLC-DAD-MS)对桑白皮药材特征峰进行定性鉴别,根据保留时间、紫外吸收曲线和正离子模式下的质荷比,经与标准品或参考文献比对,初步鉴定出3个化合物,分别为桑皮苷A(1号峰)、桑白皮素C(14号峰)和桑根皮素(20号峰),表明此方法可用于桑白皮药材的质量控制。  2.入血成分的分析:本研究采用连续给药三天,每天两次的给药方式,在末次给药60min后取血,采用甲醇沉淀血清中蛋白的处理方法,血清中各峰数量及峰面积达到最大,经 LC-MS鉴定出入血成分主要为桑皮苷 A,桑皮苷 A据研究文献资料显示具有泻肺平喘的功效,与桑白皮功效大致吻合,为桑白皮药效主要成分之一,可作为桑白皮质量评价指标性成分。  3.建立原型入血成分桑皮苷A的含量测定方法:首先确定供试品溶液的制备方法与HPLC色谱分析条件,然后进行了线性关系的考察,桑皮苷A的线性回归方程为y=4280.6x-15.768(r=0.9999),理论塔板数>5000,线性范围为0.1~1.0μg,平均回收率为98.2%,方法学考察结果的RSD均小于1%,表明此方法简便、切实可行;测定结果表明:不同产地含量差距较大,南方产含量总体高于北方产含量。
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