精原及胚胎干细胞在睾丸微环境中的增殖与分化

来源 :首都师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:syfounder
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本实验亦立足于前人研究的基础上,为了利用干细胞移植技术对支持细胞与精原干细胞的相互识别以及睾丸内支持细胞提供的微环境对干细胞的影响等问题进行探讨。本实验分别进行了外源精原干细胞在异体睾丸中的增殖与分化方面的研究,并在体外构建了具有绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞,为后续的干细胞移植到受体动物睾丸后的发育研究建立技术平台。   在第一部分实验中运用精原干细胞移植技术将同种异体外源精原干细胞移植到受体动物睾丸网内,利用睾丸内曲细精管的排列结构及其内液体的流动趋势将外源精原干细胞输送到各条曲细精原管腔内,70天后(两个小鼠生精周期),在除去内源性精原干细胞的受体小鼠睾丸内不仅观察到了外源精原干细胞发育而成的精子结构,而且通过交配试验获得了正常的仔鼠,不仅证明异体外源精原干细胞可以在受体小鼠睾丸曲细精管内逆向穿越支持细胞形成的血睾屏障,回到基底膜位置重新定位,并可以在支持细胞的营养调节下启动增殖和分化,最终形成成熟精子,而且亦证明了精原干细胞的移植确实使受体小鼠恢复生育能力。   为了便于观察和区分外源胚胎干细胞在受体睾丸内的增殖和发育,本实验利用绿色荧光蛋白(GFP)和pCR3.1真核表达载体构建了pCR3.1-GFP重组质粒,并将其转化到体外培养的小鼠胚胎干细胞中,以追踪和确定外源胚胎干细胞在受体小鼠睾丸内的运动趋势。
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