二穗短柄草细胞分裂素氧化酶基因BdCKX的克隆和功能分析

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细胞分裂素是一类重要的植物激素,具有抑制主根伸长、打破种子休眠、调控植物器官发育、参与逆境响应等多种生理生化功能。细胞分裂素氧化酶可以有效降低植物内源细胞分裂素水平,其相关研究对于揭示植物发育机理,进而改良作物品种具有重要意义。本研究选择了两个细胞分裂素氧化酶基因BdCKX1和BdCKX2,通过荧光定量分析其在二穗短柄草不同生长时期和不同组织材料中的表达情况;并构建BdCKX1-pCXSN植物超表达载体,通过农杆菌介导转入双子叶植物拟南芥和单子叶植物二穗短柄草,分析阳性转基因植株的的表型。获得了以下主要研究结果:(1)分析BdCKX1与BdCKX2的组织表达谱发现,BdCKX1和BdCKX2均在40天的叶中表达量达到峰值,同时根中表达量较低;此外,在二穗短柄草萌发后50天内,根部的表达量始终低于叶部。说明二穗短柄草萌发后40天左右是细胞分裂素氧化酶调控的关键期,且BdCKX1与BdCKX2具有一定的组织特异调控现象,不受细胞分裂素长距离运输的影响;(2)通过构建BdCKX1-pCXSN植物超表达载体,在拟南芥中异源超表达BdCKX1基因,发现T3代转基因种子相比于对照萌发时间延迟2天左右,表现为细胞分裂素缺失的表型,说明单子叶植物与双子叶植物间细胞分裂素的调控模式较为保守,存在一定的共通性;(3)通过在二穗短柄草中同源超表达BdCKX1基因,发现T1代转基因植株的生长状况受到影响,地上部分较为孱弱,说明BdCKX1参与细胞分裂素代谢途径,初步验证了BdCKX1基因的功能。
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