L型钙离子通道CaV1.2蛋白在大鼠七氟烷麻醉中的作用研究

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目的探索CaV1.2蛋白在大鼠七氟烷麻醉中的作用。方法大鼠采用数字表法随机分为5组(n=8):对照组(control组)、七氟烷1h组(sevo 1h)、七氟烷2h组(sevo 2h)、七氟烷3h组(sevo 3h)、七氟烷4h组(sevo 4h)。control组吸入氧气复合空气,其余各组均为2MAC左右七氟烷诱导麻醉,之后以1.5MAC左右七氟烷维持麻醉各1h、2h、3h、4h。记录七氟烷麻醉下各组大鼠翻正反射消失的时间,监测并记录麻醉前(T1)、麻醉中(T2)、麻醉结束(T3)三个时间点大鼠生命体征。麻醉结束后心尖取血0.5ml进行血气分析,断头取脑进行蛋白水平的检测。激动剂组:进行量效关系分析,FPL64176分为0.1umol,1umol,10umol三个浓度梯度经大脑侧脑室置管给药,进行麻醉,记录麻醉诱导的时间(翻正反射消失),常规记录监测生命体征,麻醉结束后断头取脑进行Western blot及免疫组化分析。抑制剂组:随机分为3组(n=8):control(含DMSO),sevo 4h,isradipine组,侧脑室置管给药,进行镇痛镇静评分。结果HE染色表明1.5MAC左右七氟烷对大鼠神经细胞无影响;各组大鼠翻正反射消失时间无差异;Western blot结果显示:与control组比较,sevo 1h、sevo 2h、sevo3h、sevo 4h CaV1.2蛋白表达逐渐下降,且在sevo 3h、sevo 4h下降有统计学意义(P<0.05),并且sevo 4h与sevo 3h相比下降也有明显差异(P<0.05);免疫组化结果表明:与control相比,CaV1.2阳性细胞表达依次减少有统计学意义(P<0.05)。激动机组:与control组比较,FPL64176组的大鼠翻正反射消失的时间延长,有统计学意义(P<0.05);Western blot结果表明:与control组比较,FPL64176组大鼠CaV1.2蛋白表达明显增高有显著差异(P<0.05),sevo 4h+FPL64176组与sevo 4h组相比CaV1.2蛋白表达增高有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示:与control组比较,FPL64176组大鼠CaV1.2阳性细胞表达明显增高有显著差异(P<0.05),sevo 4h+FPL64176组与sevo 4h组相比CaV1.2细胞表达增高有统计学意义(P<0.05)。抑制剂组:Western blot结果表明:与control相比,isradipine组CaV1.2蛋白表达下降有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果表明:与control相比,isradipine组CaV1.2阳性细胞减少有显著差异(P<0.05)。与control相比,isradipine组镇痛镇静评分(VOCR与TRP评分)下降有统计学意义(P<0.05)。结论七氟烷麻醉下CaV1.2蛋白逐渐减少,增强CaV1.2表达后麻醉诱导时间明显延长,抑制CaV1.2后对大鼠有镇静镇痛作用。
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