基因重组黄鳝(Monopterus albus)FSHβ,LHβ和垂体糖蛋白激素α亚基的表达和纯化的研究

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促性腺激素(gonadotropin,GtH),即卵泡刺激素(FSH)和促黄体激素(LH),由腺垂体促性腺激素细胞合成和分泌,在脊椎动物的生殖活动中起着重要的调节作用。为了研究黄鳝性逆转的内分泌调控机制,本实验室的前期研究工作中已经克隆了黄鳝FSHβ、LHβ和垂体糖蛋白激素α亚基的全长cDNA序列。序列分析发现黄鳝FSHβcDNA编码的成熟蛋白缺失了C-端保守性的第12个半胱氨酸残基。为了验证我们得到的黄鳝FSHβcDNA序列的正确性,本实验首先通过克隆FSHβ3cDNA和3基因组序列,确定了黄鳝FSHβ的全长cDNA序列。研究表明:黄鳝FSHβ全长cDNA为549bp,开放读码框编码111个氨基酸,成熟蛋白缺失了C-端保守性的第12个半胱氨酸残基序列,因此黄鳝FSHβ是目前发现的唯一一种缺少第十二位半胱氨酸残基的促性腺激素。在研究LHβ亚基在黄鳝性腺的表达时,发现存在一种新的剪接形式,即在第一和第二个外显子中间多了第一内含子3端的95个核苷酸。 为了进一步研究黄鳝促性腺激素的结构和功能,制备特异性抗体,本研究通过构建FSHβ,LHβ和PGHα的重组表达载体,在大肠杆菌中由IPTG诱导表达重组蛋白,并进行了重组蛋白的分离纯化的初步研究。由于黄鳝FSHβ的特殊性,根据其cDNA序列,定点突变了终止密码,构建了一个突变型的重组表达载体,为以后的功能研究做准备。总之,在本研究中,我们确证了黄鳝GtH的cDNA序列,获得了重组蛋白,为以后黄鳝GtH的生理功能的研究奠定了基础。
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