论文部分内容阅读
肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一。肿瘤细胞主要存在两种能量代谢途径,有氧呼吸和无氧糖酵解,并且有时以一种为主。因此治疗时,针对不同代谢途径,选用相应的药物,设计合理的治疗方案,是一种个性化性治疗的有效方式。该方法实施的先决条件即为肿瘤能量代谢途径的鉴定。寻找能量代谢途径标志基因是实现这一策略的基础,本文通过比较不同能量代谢途径的细胞,进而寻找相应的标志基因。
本文共采用六种细胞,使用有氧呼吸和无氧呼吸途径抑制剂处理细胞后,得到六种细胞的生长数据。通过比对六种细胞对抑制剂的敏感性确定其能量代谢类型,发现HeLa、293-T细胞以有氧呼吸为主,而U251、MCF-7、HepG-2细胞以无氧呼吸为主。丙酮酸脱氢酶(PDH)和乳酸脱氢酶(LDH)分别是有氧呼吸和无氧呼吸的关键酶,通过分析上述六种细胞中LDH和PDH的蛋白水平和酶活性,发现以无氧呼吸为主的细胞,其LDH的活性以及蛋白表达水平都比较高,而PDH活性及蛋白水平较低;相反,以有氧呼吸为主的细胞中PDH活性高,而LDH活性较低。血清饥饿胁迫条件下,也有同样的规律。
对以有氧呼吸为主的HeLa和以无氧呼吸为主的U251细胞在细胞周期中酶活变化进行观测,发现有氧呼吸的HeLa细胞中PDH活性变化较平稳,而LDH活性变化较大;而无氧活性为主的U251细胞中,LDH活性变化较平稳,而PDH活性变化较大。线粒体活性检测显示,在细胞周期过程中,有氧呼吸为主的HeLa细胞线粒体活性最初发生震荡,但最后趋于平缓;而以无氧呼吸为主的U251细胞在整个细胞周期中处于震荡状态,与PDH酶活变化规律相似。QF-PCR结果显示,mTERF2与mTERF4基因与代谢途径存在相关性,mTERF2基因随着细胞无氧呼吸能力增强转录升高,mTERF4基因随着细胞无氧呼吸能力增强转录降低。上述结果显示,LDH,PDH,mTERF2和mTERF4的表达水平可以显示细胞的代谢类型,有望作为肿瘤细胞能量代谢途径鉴定的标志基因。