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母猪卵泡发育是一个受内分泌、旁分泌及基因调节的复杂生理过程。研究卵泡的生长发育及其调控机制对更好地了解母猪的生殖机制具有重要的理论和实际意义。沉默信息调节因子2(silent information regulator2, Sir2)相关酶1(SIRT1)是一种依赖于NAD+的去乙酰化酶,目前研究发现SIRT1以许多组蛋白和非组蛋白为底物,参与多种细胞生物学功能,如：基因转录沉默、细胞生长周期调节、能量代谢、胰岛素分泌、血管生成、神经保护、细胞衰老等。最近几年研究发现,SIRT1介导生殖激素受体信号通路,参与动物繁殖性能调控。然而,SIRT1基因在母猪繁殖调控中的研究还未见报道。为进一步探讨母猪卵泡发育机制,本研究以母猪卵巢组织为主要材料,探讨SIRT1基因在母猪卵泡发育中的作用。结果如下：1、SIRT1基因在猪不同组织中的表达具有规律性通过qRT-PCR和Western blot方法分析猪的脑、肝脏、胰脏、脂肪、卵巢、肾脏、心脏、脾脏等组织中SIRT1mRNA和蛋白表达量,结果发现在各组织中均存在SIRT1基因表达,但不同组织中SIRT1基因的表达量存在极显著差异。各组织中SIRT1mRNA表达量顺序分别为：卵巢>脑>脾脏>脂肪>肾脏>肝脏>心脏>胰脏；SIRT1蛋白表达量顺序分别为：卵巢>脑>脂肪>肝脏>肾脏>脾脏>心脏>胰脏。在猪的卵巢、脑、脂肪组织中SIRT1mRNA和蛋白表达水平均显著高于其他组织。2、SIRT1基因在猪卵巢组织中的表达具有规律性利用免疫组织化学方法检测SIRT1基因在猪卵巢组织中的表达定位,利用qRT-PCR和Western blot方法分析不同发育阶段卵泡和不同闭锁程度卵泡中SIRT1mRNA和蛋白表达量。结果发现,在猪卵巢卵母细胞、颗粒细胞、膜细胞、黄体细胞中均检测到SIRT1基因表达,其中,颗粒细胞中SIRT1基因的表达丰度显著高于膜细胞和黄体细胞,在间质细胞中未检测到SIRT1基因表达,且SIRT1基因在卵巢组织中的亚细胞定位为细胞核。SIRT1基因在猪卵巢不同发育阶段卵泡和不同闭锁程度卵泡中的表达具有规律性。不同发育阶段卵泡中SIRT1基因表达量顺序分别为：直径1.5～3.0mm>直径≤1.5mm>直径3.0～5.0mm>直径≥5.0mm.不同闭锁程度卵泡中SIRT1基因表达量顺序分别为：晚期闭锁卵泡>早期闭锁卵泡>健康卵泡。以上结果表明SIRT1基因在猪卵泡发育中起着重要作用。3、SIRT1基因在猪卵巢颗粒细胞凋亡中的作用在体外培养的猪卵巢颗粒细胞中,分别添加SIRTl基因激活剂白藜芦醇(RES)和抑制剂尼克酰胺(NAM), qRT-PCR方法检测不同处理组中SIRT1mRNA的表达量,流式细胞术方法检测不同处理组颗粒细胞凋亡率,MTT法检测不同处理组颗粒细胞增殖情况。结果发现,RES和NAM能剂量依赖性激活或抑制SIRTl基因mRNA的表达；RES组颗粒细胞凋亡率明显增加,细胞增殖率下降；NAM组颗粒细胞凋亡率降低,细胞增殖率上升。RES处理组和NAM处理组中凋亡抑制因子BcL-2表达量下降,但NAM组中BcL-2表达量低于RES组；RES处理组促凋亡因子Bax mRNA表达明显增加,NAM组Bax mRNA表达量未发生变化；RES组Caspase-3表达极显著升高,NAM组Caspase-3表达显著下降。以上结果表明,RES和NAM可引起SIRT1基因表达量的变化,RES处理组颗粒细胞更容易发生凋亡,NAM处理组颗粒细胞则抑制凋亡。SIRTl基因的表达在猪卵巢颗粒细胞凋亡过程中起着重要的作用。4、SIRT1基因对猪卵巢颗粒细胞雌激素分泌的影响及与相关受体表达量的变化规律采用猪雌激素酶联免疫分析试剂盒,检测不同浓度白藜芦醇和尼克酰胺培养的猪卵巢颗粒细胞培养液中雌激素浓度。发现随着白藜芦醇浓度升高,SIRT1mRNA表达量和培养液中雌激素浓度逐渐升高；相反,随着尼克酰胺浓度的升高,SIRT1mRNA表达量和培养液中雌激素浓度逐渐下降,SIRT1mRNA表达量和雌激素浓度相关系数为0.9668。qRT-PCR方法检测各组中FSHR、LHR、ER2mRNA表达量,发现白藜芦醇处理组中FSHR、ER2mRNA表达量升高,与对照组比较,差异达到显著水平(P<0.05)。尼克酰胺处理组FSHR、ER2mRNA表达量下降,与对照组比较,差异达到显著水平(P<0.05)。白藜芦醇和尼克酰胺组中的LHR mRNA表达均下降,与对照组比较,差异达到显著水平(P<0.05)。本研究发现SIRT1基因在猪卵巢组织中普遍表达,其过量表达与颗粒细胞凋亡相关,且其表达变化会影响颗粒细胞中生殖激素受体的表达及雌激素分泌,这些结果表明,SIRT1基因在猪卵巢卵泡发育中发挥重要的调控作用。