【摘 要】
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哺乳动物的精子产生于睾丸,但却是在附睾管腔微环境相关因子的作用下成熟。在这一过程中,附睾蛋白扮演着重要角色。附睾关键蛋白分泌紊乱会导致精子成熟异常,进而导致雄性不育,因此,理解附睾特异蛋白的功能有助于治疗雄性不育。之前的研究表明,GLB1L4（Beta-Galactosidase-1 Like 4,GLB1L4）蛋白在大鼠附睾头部主细胞特异性表达,其能被分泌到附睾管腔中,当附睾发育完成,精子进入附
【基金项目】
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陕西省农业科技项目（编号:2014K01-20-01）； 国家自然科学基金（编号:C170104-31172205）；
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哺乳动物的精子产生于睾丸,但却是在附睾管腔微环境相关因子的作用下成熟。在这一过程中,附睾蛋白扮演着重要角色。附睾关键蛋白分泌紊乱会导致精子成熟异常,进而导致雄性不育,因此,理解附睾特异蛋白的功能有助于治疗雄性不育。之前的研究表明,GLB1L4（Beta-Galactosidase-1 Like 4,GLB1L4）蛋白在大鼠附睾头部主细胞特异性表达,其能被分泌到附睾管腔中,当附睾发育完成,精子进入附睾管腔时,GLB1L4蛋白能结合到精子上,其在附睾发育和精子成熟中可能扮演着重要作用。但其如何影响精子成熟,对精子的成熟发挥什么作用还不清楚。本研究通过实验得出以下主要结果:1.组织定位实验发现,GLB1L4蛋白不仅存在于附睾头上皮细胞中,而且也存在于附睾管腔各部分精子上,说明附睾主细胞能将GLB1L4蛋白分泌到附睾管腔液中,最终运输到附睾尾部的精子上。2.通过体内注射sh RNA慢病毒敲低Glb1l4的表达水平,发现获能的精子超激活运动指标和蛋白质酪氨酸磷酸化水平显著降低（P<0.05）。GLB1L4敲低组大鼠与正常母鼠交配后,产仔数显著降低（P<0.05）。说明GLB1L4通过影响精子获能,进一步影响大鼠生育能力。3.大鼠附睾腔液中的GLB1L4蛋白主要存在于附睾外泌体中;且体外培养的大鼠原代附睾头上皮细胞的外泌体中负载大部分的GLB1L4蛋白,该外泌体能与附睾尾精子结合。说明GLB1L4能通过附睾头上皮细胞分泌的外泌体在附睾中运输,到达附睾尾部与精子相互作用。4.大鼠附睾头上皮细胞的培养液中添加棕榈酰化抑制剂2-BP（2-Bromopalmitate,2-BP）后,细胞中GLB1L4蛋白棕榈酰化程度显著降低,并且其在外泌体中的含量也显著减少。通过在线网站预测,发现GLB1L4蛋白氨基酸序列第12位和第15位半胱氨酸是最可能的棕榈酰化修饰位点,突变掉这两个氨基酸后,发现GLB1L4蛋白在小鼠附睾头上皮PC1细胞系中的定位由点状分布变为弥散状态。表明GLB1L4蛋白棕榈酰化状态存在于附睾外泌体中。总之,棕榈酰化修饰能使GLB1L4蛋白更易于装载到附睾管腔外泌体中,使其能在附睾管腔中稳定存在,最终到达附睾尾并与附睾尾部精子结合,影响精子获能,从而对大鼠生育力产生影响。
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