论文部分内容阅读
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的一种急性传染病,是目前严重危害世界养猪业的一种重要病毒病,给养猪业造成了巨大经济损失。为了有效的控制该病的发生,众多科学家从事疫苗的开发和研究。然而,由于动物猪体在感染PRRSV后所产生的免疫反应和疾病的发展过程受多种因素的影响,致使疫苗的免疫效果不尽人意;其中,病毒感染的抗体依赖性增强作用(antibody-dependent enhancement,ADE)是关键影响因素之一。ADE即指机体的抗体水平在未达到中和抗体浓度时,可协助病毒进入靶细胞,提高感染效率。目前,ADE作用已在多个科属的40多种病毒的感染中发现,如登革热病毒、人免疫缺陷病毒、西尼罗河病毒等。与PRRSV相似的是这些病毒多表现为嗜好在免疫细胞中繁殖,容易引发宿主的持续性感染。常规疫苗免疫防制这类具有ADE作用的病毒病时常常难以奏效,动物免疫后,对该病毒的易感性反而会增加。因此,有必要利用病毒模型,探讨ADE在这类病毒中的致病机制。因此,为了更有效的防控PRRS的发生,本课题即从ADE角度出发,阐释了PRRSV的致病机理。本研究发现当亚中和活性的PRRSV特异性抗体存在时,PRRSV体外感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)能力增强,即,亚中和活性的抗体可促进病毒的感染和释放。已有的报道表明,介导ADE效应的细胞表面分子有三种Fcγ受体(FcγRs),即:FcγRⅠ(CD64)、FcγRⅡ(CD32)和FcγRⅢ(CD16)。通过运用荧光定量PCR方法,本研究发现CD16在PAMs的转录水平远远高于CD32和CD64;同时,流式细胞术和Western blotting的结果也表明CD16在PAMs上高效表达。因此,本研究对猪源CD16在PRRSV的ADE效应中发挥的作用进行研究。首先,运用抗CD16的单克隆抗体特异性阻断PAMs表面的CD16,探究CD16在PRRSV的ADE效应中是否发挥作用。结果发现,CD16功能被抗体特异性阻断后,PRRSV亚中和活性的抗体引发的PRRSV的ADE效应显著降低,说明PAMs表面的CD16能够介导PRRSV的ADE。由于PAMs表面存在三种不同的FcγRs,为了特异性研究CD16,本研究在无FcγRs表达的HEK293-T细胞和COS-7细胞上特异性表达猪源CD16,进一步验证CD16介导的ADE效应。研究结果发现,PRRSV-抗体免疫复合物可特异性吸附在HEK293-T/CD16细胞和COS-7/CD16细胞,进而使得PRRSV内化进入细胞。最后,本研究还发现内化的PRRSV可以在这些细胞内发生复制,并释放出具有活性的子代病毒。此外,本研究还证明猪源CD16的高效表达需要和Fc受体γ链的协同表达。本研究对PRRSV的ADE效应提出新的机制,即首次证明CD16能介导PRRSV的ADE,为进一步揭示PRRSV的致病机制提供新理论。本研究提示当动物机体存在亚中和活性的抗体时,PRRSV可能对CD16阳性的细胞具有一定的趋化性,使得PRRSV在感染的过程中有更广泛的分布性,本研究为PRRSV疫苗的研究提供了新思路。