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研究背景和目的：
膀胱癌(BC)是世界范围内第九大最常见的癌症，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，全球每年约有429,800例新发病例，高发病率和高死亡率是它的特点之一。尽管化疗已用于BC治疗，但它仅提供了有限的益处，并且5年生存率仍然很低。因此，仍然缺乏针对BC的治疗策略。对发病机理的了解有限，是造成BC高发和高死亡率的最关键原因之一。因此，了解BC的分子机制是必不可少的。
环状RNA(circRNAs)是一类由共价闭合环结构形成的新型内源性非编码RNA分子，其特点是没有5′端帽和3′端多聚核苷酸尾结构。circ-RNA最初被认为是剪接错误，但后来人们逐渐发现circ-RNA在许多生物学过程中均起作用。愈来愈多的证据表明许多环状RNA参与多种肿瘤的发生和发展过程。但它们在不同肿瘤中的作用各不相同。研究表明，circ-PVT1促进胃癌增殖，而circ-ZKSCAN1抑制肝癌的生长和迁移。这种调节多样性意味着特定的circRNA在某些癌症类型中具有独特的功能，因此，我们决定探索BC中独特的circRNA功能，并研究circ-VANGL1的功能。circ-VANGL1源于VANGL1mRNA的第3外显子和第4外显子的反向剪接。通过对已发表的人类BC组织和配对正常膀胱组织的RNA测序数据进行生物信息学分析，发现与正常膀胱组织相比circ-VANGL1在BC组织中的表达显著上调。此外,研究还报道了VANGL1促进肿瘤转移。因此，circ-VANGL1可能在BC的进展中起重要作用。
本研究结果表明，circ-VANGL1在BC组织中表达上调。然后，我们通过体内外实验探索circ-VANGL1基因对BC细胞生物学功能的影响。体外细胞功能实验结果表明，下调circ-VANGL1的表达可以抑制BC细胞系的增殖、迁移和侵袭能力；体内动物实验结果也显示，circ-VANGL1的表达下调可明显抑制肿瘤的生长。机制研究发现，circ-VANGL1这些功能的实现主要依赖于miR-605-3p的活性。circ-VANGL1通过结合并抑制了miR-605-3p的活性，从而引起VANGL1的表达上调，进而促进了BC的进展。
方法：
1、通过运用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测膀胱癌细胞系和于我院手术切除的膀胱癌组织及正常对照组织中circRNA-VANGL1的表达水平，统计分析实验结果。
2、通过CCK8、Transwell、克隆形成及流式等实验，观察在膀胱癌细胞中下调circRNA-VANGL1的表达后，膀胱癌细胞周期、增殖和侵袭迁移能力的改变；
3、基于环状RNA与miRNA结合以调节其功能的理论，我们通过生物信息学网站预测到CircRNA-VANGL1相互作用的miRNA和miRNA的下游靶基因，然后利用荧光素酶报告基因和生物素偶联探针等实验方法证实它们之间的相互作用，并进一步探讨circRNA-VANGL1通过调控miRNA进而影响下游靶基因的表达的具体机制。
4、通过CCK8、Transwell和荧光素酶报告基因等实验验证cirRNA-VANGL1通过circRNA?miRNA?mRNA调控轴，调控miR-605-3p影响VANGL1的表达，进而影响膀胱癌细胞的增殖和侵袭转移能力。
结果：
1、与正常膀胱组织相比，Circ-VANGL1在膀胱癌组织中呈现高表达，与膀胱癌患者的生存期呈负相关，表明Circ-VANGL1可能在膀胱癌中起促癌作用。
2、体外实验通过在膀胱癌细胞T24和EJ中下调Circ-VANGL1的表达，膀胱癌细胞增殖和侵袭转移能力明显得到抑制，细胞周期阻滞在G0/G1期。
3、通过生物信息学网站预测到CircRNA-VANGL1相互作用的miRNA为miR-605-3p及其下游靶基因VANGL1，通过荧光素酶报告基因和生物素偶联探针等实验方法证实了这一预测结果，并在膀胱癌组织和细胞中验证miR-605-3p及其下游靶基因VANGL1之间的相关性，最后证明CircRNA-VANGL1通过调控miR‐605‐3p影响VANGL1的表达。
4、通过体外膀胱癌T24和EJ细胞实验和体内裸鼠成瘤等实验说明了circ-VANGL1通过作为一种竞争性内源性RNA，抑制miR-605-3p促进VANGL1的表达进而促进膀胱癌的进展。
结论：
综上所述，我们的研究发现circ‐VANGL1在膀胱癌中呈高表达中并作为癌基因发挥作用，揭示了膀胱癌进程中一个关键的circ-VANGL1/miR-605-3p/VANGL1功能轴。
膀胱癌(BC)是世界范围内第九大最常见的癌症，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，全球每年约有429,800例新发病例，高发病率和高死亡率是它的特点之一。尽管化疗已用于BC治疗，但它仅提供了有限的益处，并且5年生存率仍然很低。因此，仍然缺乏针对BC的治疗策略。对发病机理的了解有限，是造成BC高发和高死亡率的最关键原因之一。因此，了解BC的分子机制是必不可少的。
环状RNA(circRNAs)是一类由共价闭合环结构形成的新型内源性非编码RNA分子，其特点是没有5′端帽和3′端多聚核苷酸尾结构。circ-RNA最初被认为是剪接错误，但后来人们逐渐发现circ-RNA在许多生物学过程中均起作用。愈来愈多的证据表明许多环状RNA参与多种肿瘤的发生和发展过程。但它们在不同肿瘤中的作用各不相同。研究表明，circ-PVT1促进胃癌增殖，而circ-ZKSCAN1抑制肝癌的生长和迁移。这种调节多样性意味着特定的circRNA在某些癌症类型中具有独特的功能，因此，我们决定探索BC中独特的circRNA功能，并研究circ-VANGL1的功能。circ-VANGL1源于VANGL1mRNA的第3外显子和第4外显子的反向剪接。通过对已发表的人类BC组织和配对正常膀胱组织的RNA测序数据进行生物信息学分析，发现与正常膀胱组织相比circ-VANGL1在BC组织中的表达显著上调。此外,研究还报道了VANGL1促进肿瘤转移。因此，circ-VANGL1可能在BC的进展中起重要作用。
本研究结果表明，circ-VANGL1在BC组织中表达上调。然后，我们通过体内外实验探索circ-VANGL1基因对BC细胞生物学功能的影响。体外细胞功能实验结果表明，下调circ-VANGL1的表达可以抑制BC细胞系的增殖、迁移和侵袭能力；体内动物实验结果也显示，circ-VANGL1的表达下调可明显抑制肿瘤的生长。机制研究发现，circ-VANGL1这些功能的实现主要依赖于miR-605-3p的活性。circ-VANGL1通过结合并抑制了miR-605-3p的活性，从而引起VANGL1的表达上调，进而促进了BC的进展。
方法：
1、通过运用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测膀胱癌细胞系和于我院手术切除的膀胱癌组织及正常对照组织中circRNA-VANGL1的表达水平，统计分析实验结果。
2、通过CCK8、Transwell、克隆形成及流式等实验，观察在膀胱癌细胞中下调circRNA-VANGL1的表达后，膀胱癌细胞周期、增殖和侵袭迁移能力的改变；
3、基于环状RNA与miRNA结合以调节其功能的理论，我们通过生物信息学网站预测到CircRNA-VANGL1相互作用的miRNA和miRNA的下游靶基因，然后利用荧光素酶报告基因和生物素偶联探针等实验方法证实它们之间的相互作用，并进一步探讨circRNA-VANGL1通过调控miRNA进而影响下游靶基因的表达的具体机制。
4、通过CCK8、Transwell和荧光素酶报告基因等实验验证cirRNA-VANGL1通过circRNA?miRNA?mRNA调控轴，调控miR-605-3p影响VANGL1的表达，进而影响膀胱癌细胞的增殖和侵袭转移能力。
结果：
1、与正常膀胱组织相比，Circ-VANGL1在膀胱癌组织中呈现高表达，与膀胱癌患者的生存期呈负相关，表明Circ-VANGL1可能在膀胱癌中起促癌作用。
2、体外实验通过在膀胱癌细胞T24和EJ中下调Circ-VANGL1的表达，膀胱癌细胞增殖和侵袭转移能力明显得到抑制，细胞周期阻滞在G0/G1期。
3、通过生物信息学网站预测到CircRNA-VANGL1相互作用的miRNA为miR-605-3p及其下游靶基因VANGL1，通过荧光素酶报告基因和生物素偶联探针等实验方法证实了这一预测结果，并在膀胱癌组织和细胞中验证miR-605-3p及其下游靶基因VANGL1之间的相关性，最后证明CircRNA-VANGL1通过调控miR‐605‐3p影响VANGL1的表达。
4、通过体外膀胱癌T24和EJ细胞实验和体内裸鼠成瘤等实验说明了circ-VANGL1通过作为一种竞争性内源性RNA，抑制miR-605-3p促进VANGL1的表达进而促进膀胱癌的进展。
结论：
综上所述，我们的研究发现circ‐VANGL1在膀胱癌中呈高表达中并作为癌基因发挥作用，揭示了膀胱癌进程中一个关键的circ-VANGL1/miR-605-3p/VANGL1功能轴。