儿童外周神经母细胞源性肿瘤的CNV及其临床病理学意义

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目的探讨儿童外周神经母细胞源性肿瘤(peripheral neuroblastic tumors,pNTs)的全基因组拷贝数改变(Copy Number Variation,CNV)及9个常见肿瘤相关基因的突变,并分析这些改变的临床病理学意义。材料与方法收集24例pNTs福尔马林固定、石蜡包埋组织标本及其患者临床病理学信息,其中包括16例神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)及8例节细胞神经母细胞瘤(Ganglioneuroblastoma,GNB)。运用全基因组扫描技术(Oncoscan),结合Oncoscan Nexus软件,检测并分析全基因组拷贝数改变(Copy Number Variation,CNV)【包括普通杂合性缺失(Loss of Heterozygosity,LOH)和拷贝数中性杂合性缺失(Copy Neutral LOH,CNLOH)】及9个常见肿瘤相关基因(BRAF,EGFR,IDH1,IDH2,KRAS,NRAS,PIK3CA,PTEN,TP53)突变。同时,探讨CNV及突变与临床病理学指标(性别、年龄、临床分期、危险度分级及MYCN基因扩增)的相关性。结果24例pNTs组织中,所有染色体都存在一个或一个以上CNV,且获得远远多于缺失,其中7号染色体及17号染色体获得频率较高,分别为62.5%(15/24)及87.50%(21/24),并且17q获得更易发生于高危组病例中(P=0.007)。除了18号及Y染色体外,其余22条染色体都存在LOH,其中发生频率较高的前五位为1号、3号、11号、16号及X染色体,分别为50%(12/24)、66.67%(16/24)、37.50%(9/24)、95.83%(23/24)及54.17%(13/24)。而且,NB的总CNV明显多于GNB(P=0.000)。染色体CNV区段的基因所涉及的主要信号转导通路有染色质修饰(83.33%,20/24),RAS通路(79.17%,19/24),细胞周期/凋亡通路(75%,18/24),基因组稳定(75%,18/24),NOTCH通路(66.67%,16/24),TGF-β通路(66.67%,16/24),HH通路(66.67%,16/24),APC通路(58.33%,14/24),转录调控通路(54.17%,13/24)及PI3K通路(50%,12/24)。另外,在24例pNTs患儿中,6例(25%,6/24)存在CNLOH,所涉及染色体或染色体区段为5号、9号、16号、19号及3p、12q、15q,并且此6例患儿均为NB。我们的实验结果还显示,24例pNTs中,9例(37.5%,9/24)存在TP53突变,7例(29.17%,7/24)存在NRAS突变,7例(29.17%,7/24)存在EGFR突变,3例(12.5%,3/24)存在KRAS突变,1例(4.17%,1/24)存在PTEN突变,1例(4.17%,1/24)存在PIK3CA突变。24例pNTs均不存在BRAF、IDH1及IDH2的突变。发生频率最高的TP53突变与pNTs患者的年龄、性别、临床分期、危险度分级及生存时间无明显相关性。结论Oncoscan能够非常好地应用于福尔马林固定、石蜡包埋组织,且一次性可完成全基因组CNV及9个肿瘤相关基因突变的检测,同时可定位CNV区域所涉及的肿瘤相关基因。pNTs是存在多种分子遗传学变化的肿瘤。CNV特别是拷贝数获得是pNTs的重要遗传学变化,CNLOH可能是NB的独特变化。少数CNV具有一定临床病理学意义。关于CNV区域所涉及基因及相关信号转导通路在pNTs中的意义尚需进一步研究。
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